WWW.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 13 |
-- [ Страница 1 ] --

УДК 576.8

ББК 28.083

Т 65

Ответственный редактор

доктор биологических наук С.А. Беэр

Составитель

доктор биологических наук

С.В. Зиновьева

Редколлегия:

доктор биологических наук С.А. Беэр,

доктор биологических наук С.В. Зиновьева (зам. ответственного редактора),

доктор биологических наук А.Н. Пельгунов, доктор биологических наук С.О. Мовсесян, доктор биологических наук С.Э. Спиридонов, кандидат биологических наук М.В. Воронин, Т.А. Малютина (ответственный секретарь) Рецензенты:

академик РАМН В.П. Сергиев, член-корреспондент РАСХН А.В. Успенский Труды Центра паразитологии / Центр паразитологии Ин-та проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН. – М.: Наука, 1948. –. – ISSN 0568-5524.

T. XLVII: Морфология, систематика и экология паразитов / [отв. ред.: С.А. Беэр]. – 2012. – с.: ил. – ISBN 978-5-02-037969- В 47-м томе трудов Центра паразитологии ИПЭЭ РАН, рассматриваются современные аспекты мор фологии, систематики, биологии, экологии и прикладной роли паразитических (зоо- и фито-) организмов.

Представлены публикации известных специалистов по паразитофауне различных филогенетических и экологических групп промежуточных и окончательных хозяев паразитов, статьи по видовой и популяци онной дифференциации гельминтов, биологии и систематике паразитов. В ряде публикаций дается анализ структур паразитарных систем, затрагиваются теоретические аспекты паразитологии.

Для паразитологов, фито- и энтомонемамологов, агробиологов.

ISBN 978-5-02-037969-5 © Центр паразитологии Института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН, © Российская академия наук и издательство «Наука», серия «Труды Центра паразитологии» (разработка, оформление). 1948 (год основания), © С.В. Зиновьева, составление, © Редакционно-издательское оформление.

Издательство «Наука», Предисловие 47-й том включает работы по проблемам зоо- и фитопаразитологии. В нем представлены статьи сотрудников Центра паразитологии ИПЭЭ РАН и спе циалистов других институтов России и зарубежных стран.

В сборнике рассматриваются современные аспекты морфологии, систе матики и экологии, разнообразия и прикладной роли паразитических орга низмов (гельминтов, простейших). Представлены публикации известных специалистов по указанным направлениям различных филогенетических и экологических групп промежуточных, дополнительных и окончательных хо зяев паразитов, статьи по видовой и популяционной дифференциации гель минтов, морфологии и систематике паразитов. Ряд статей посвящен общим и прикладным проблемам фитогельминтологии.

В статье С.В. Зиновьевой подробно анализируются иммунобиологические аспекты взаимоотношений растений и паразитических нематод. В устойчи вых к нематодам растениях выявлены гены, связанные со стрессом и защи той, в том числе кодирующих гомологи ферментов, которые приводят к по вышению уровня активных форм кислорода и белков, связанных с защитным ответом. Имеющиеся результаты показывают, что гены, которое связаны с защитой, преимущественно вовлечены в апоптоз клетки и сверхчувствитель ный ответ. Медиатором для возбуждения защитного ответа в клетки служит салициловая кислота.

В статье Н.Д. Романенко с соавторами описывается разработка научных основ экологически безопасных способов и средств защиты растений от комплекса, наиболее опасных групп вредных организмов при выращивании различных сельскохозяйственных культур (картофеля, овощных, зерновых и зернобобовых, плодовых, ягодных, винограда и других культур. В другой статье того же автора приводятся морфометрические особенности и распро странение на территории бывш. СССР новых для науки видов нематод семей ства Longidoridae (Nematoda: Dorylaimida) – крупных по размерам, медленно развивающихся эктопаразитов многих видов как культурных, так и дикора стущих растений.

В статье (аналитическом обзоре) Т.А. Малютиной содержится анализ результатов экспериментальных исследований, связанных с определением физиологической функции гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) у пара зитических червей, которые были получены зарубежными и отечественны ми исследователями лет. ГАМК является простым по химической структуре биогенным аминосоединением, которое впервые было выявлено в головном мозге млекопитающих. ГАМК оказывает тормозящее действие на передачу возбуждения в синапсах центральной нервной системы позвоночных, вы зывая эффект торможения. Установлено, что ГАМК является самым распро страненным тормозным медиатором в центральной нервной системе млеко питающих. В последующие годы было установлено, что ГАМК встречается в центральной нервной системе млекопитающих повсеместно и играет важную роль не только в передаче нервного возбуждения.

Различным аспектам морфологии трематод посвящены статьи К.К. Ахме това, О.П. Зазорновой, А.А. Кириллова и соавторов, Е.А. Сербиной и соавто ров, Н.Б. Терениной и М.О. Густафссон.

Проблемам биологии нематод посвящены статьи К.В. Акопяна, А.П. Ак сёнова и соавторов, О.А. Кулинич и соавторов, М.В. Приданникова и X. Ток сай, Ж.В. Удаловой., В.Н. Чижова и С.А. Субботина, Н.Ю. Кириллова и соав торов, М.С. Панайотова и соавторов.

Исследованию цестод посвящены работы А.Н. Пельгунова, Н.А. Поспе хова.

История научных связей в области экологической паразитологии между российскими и украинскими гельминтологическими школами рассматрива ется в статье Л.В. Чесновой.





Разработке методов прогнозирования и профилактики наиболее патоген ных гельминтов диких копытных в биоценозах Подмосковья посвящена со держательная работа Л.П. Маклаковой.

История и современное состояние исследований энтомопаразитиче ских грибов малоизвестного анаморфного рода Evlachovae (Ascomycota:

Cordycipitaceae) подробно освещены в работе Б.А. Борисова.

Все работы, включенные в сборник выполнены на современном научном уровне. Они непременно привлекут внимание специалистов - общих биоло гов, паразитологов, зоологов, ботаников, фитопатологов, экологов, работни ков прикладных направлений паразитологии.

сеЗоННАЯ диНАМиКА ЧислеННосТи ПоПУлЯЦии ЭКТоПАрАЗиТиЧесКоЙ НеМАТодЫ

XIPHINEMA INDEX THORNE ET ALLEN,

Представители рода Xiphinema (сем. Longidoridae) являются эктопарази тами многих ценных сельскохозяйственных культур. Они наносят растению непосредственный вред, паразитируя на корнях и питаясь за счет клеточно го содержимого. Кроме того, мощный стилет ксифинем повреждает кончики корней, открывая ворота для проникновения гнилостной, грибковой и бак териальной микрофлоры. Больные растения отстают в росте, понижается их морозостойкость и засухоустойчивость.

Ксифинемы известны также как инокуляторы фитопатогенных вирусов. В настоящее время зарегистрировано около десятка вирусных болезней, кото рые передаются этими нематодами.

Из более чем 20 видов рода Xiphinema, обнаруженных на винограде, наи более опасной является Xiphinema index. Она широко распространена во всех районах промышленного виноградарства. При паразитировании X. index про калывает своим длинным копьем ткани корня и выделяет в процессе питания пищеварительные ферменты, разрушающие эпидермальные и субэпидер мальные клетки. На месте повреждения образуются многоядерные гигант ские клетки, что приводит к разбуханию корней и образованию клювовид ных галлов. Галлообразование, в свою очередь, затрудняет движение соков, так что растение страдает от недостатка воды. Нарушается также его мине ральное питание, развитие корней задерживается, в частности, формируется недостаточно всасывающих корней. В результате блокируется рост надзем ных частей растений. Зараженные растения отстают в росте, иногда оста ются карликовыми, увядают в жаркую погоду, жизнеспособность растений уменьшается и они хуже переносят атаки вредителей и болезни. Длительное паразитирование этой нематоды может привести к гибели растения (Кралль, 1965;

Стегареску, 1980;

Романенко, 1993;

Акопян, 1991;

Hewitt, Raski, Goheen, 1958;

Rumpenhorst, Weischer, 1978).

В проведенном нами обследовании виноградников в 44 хозяйствах Арме нии на площади более 2000 га установлено широкое распространение X. index на данной культуре. В ризосфере старых виноградников (25–30 лет) X. index была обнаружена во всех обследованных почвенных пробах (100%-ная зараженность). Плотность популяции X. index в очагах зараженности Научный центр зоологии и гидроэкологии НАН Республики Армения, ул. П.Севака, 7, Ереван, Армения, e-mail: cara_akopian@mail.ru, +37410281510.

рис. 1. Характерные клювовидные расширения на корнях винограда, пораженных Xiphinema index (Шаумянский, Армавирский районы и др.) достигала 160 и более особей в 100 г почвы. Пораженные растения имели угнетенный вид, хлорозные ли стья. При обследовании корней этих растений были отмечены характерные клювовидные галлы и некрозы (рис. 1, 2).

В связи с широким распространением эктопаразитической нематоды X. index в Армении и большим практическим значением ее для культуры ви нограда, изучали некоторые вопросы биоэкологии этой нематоды (сезонную динамику численности, вертикальное распределение в почве и др.).

Круглогодичным стационарным методом исследовали виноградники сорта «Арарати» в хозяйстве Малатия Шаумянского района. Так как X. index является эктопаразитом корней и встречается по всему профилю проникно рис. 2. Галлы на корнях винограда, пораженных Xiphinema index вения корневой системы, почвенные пробы ежемесячно отбирали в ризосфе ре растений по вертикали в следующих слоях почвенного горизонта: 10–20;

21–40 и 41–60 см. Нематод выделяли методом промывки почвы через сито из мельничного газа с диаметром ячей 64 мкм. Ежемесячно анлизировали по средних проб по каждому горизонту почвы.Численность паразита на протя жении годичного цикла развития виноградной лозы колебалась в значитель ных пределах как по отдельным почвенным горизонтам, так и по основным фазам вегетативного развития винограда (рис. 3).

Вегетация винограда в Армении длится с апреля по ноябрь и проходит следующие фазы: сокодвижение (март–апрель), распускание почек (середина апреля–конец мая), цветение (июнь), рост ягод (июль), созревание ягод (ко нец июля–середина августа), физиологическая зрелость (сентябрь–октябрь), листопад (конец октября – ноябрь), покой, т.е. зимний период жизни лозы, который тянется с конца ноября (листопад) до весеннего пробуждения лозы.

Максимальное число особей X. index обнаружено в апреле, в фазе сокод вижения виноградной лозы. На глубине 10–20 см численость нематод состав ляла 135 особей, а на глубине 21–40 см – 154 особи в 100 г почвы.

рис. 3. Сезонная динамика численности X. index в ризосфере винограда на различной глубине рис. 4. Соотношение численности самок и личинок X. index в ризосфере винограда на глубине 10–20 см В последующие фазы вегетации винограда происходило заметное умень шение численности нематод до минимума в фазе роста ягод в июле. На глуби не 10–20 см обнаружены всего 24 особи, на глубине 21–40 см – 41 особь, на глубине 41–60 см – 8 особей на100 г почвы. Численность нематод оставалась невысокой на протяжении всех летних месяцев (июль–август).

Осенью наблюдалось некоторое повышение численности нематод с вы раженным пиком в фазе полной физиологической зрелости ягод в октябре.

В этот период в почвенном горизонте 21–40 см в 100 г почвы в среднем на считывается 105 особей. В почвенных горизонтах 10–20 и 41–60 см числен ность X. index составляла соответственно только 60 и 32 особей.

рис. 5. Соотношение численности самок и личинок X. index в ризосфере винограда на глубине 21–40 см рис. 6. Соотношение численности самок и личинок X. index в ризосфере винограда на глубине 41–60 см В начале зимнего периода покоя виноградной лозы (ноябрь–декабрь) чис ленность популяции паразита была низкой и колебалась в пределах 35–38, 52–57 и 19–24 особей/100 г почвы в горизонтах 10–20, 21–40 и 41–60 см со ответственно. Незначительное повышение количества особей X. index в верх них горизонтах (10–20 и 21–40 см) в январе, возможно, связано с кратковре менным потеплением, которое часто наблюдается в это время в Араратской равнине. В самый холодный месяц февраль численность нематод оставалась на низком уровне (55, 59 и 24 особи в горизонтах 10–20, 21–40 и 41–60 см со ответственно). В самом начале вегетации винограда (начало фазы сокодвиже ния), в марте, численность X. index скачкообразно повышалась и достигала 101–118 особей в верхних (10–40 см) слоях почвы, тогда как еще глубже (41– 60 см) количественных изменений популяции паразита не происходило.

Самок X. index с яйцами в половой трубке отмечали в апреле, мае и июне.

За исключением горизонта 10–20 см, в эти же месяцы численность самок преобладала над численностью личинок. На глубине 21–40 см количество са мок составляло в апреле 51%, в мае 66%, в июне 65% от общей численности популяции X. index;

на глубине 41–60 см – 67, 76 и 85% соответственно.

В летние месяцы в почве преобладали личинки преимущественно II–III возрастов. На глубине 10–20 см численность личинок в июле составляла 87%, в августе 83% от общей численности популяции, а на глубине 21–40 см – и 53% соответственно.

Зимой в верхних (10–20 и 21–40 см) почвенных горизонтах самки и ли чинки разных возрастов встречались почти в равном соотношении, а в гори зонте 41–60 см самки преобладали над личинками.

Во все сезоны года более 50% личинок находились на глубине 10–20 см и 21–40 см, а более 50% самок в слое 21–40 см, однако с увеличением глубины возрастало процентное соотношение взрослых особей в популяции. Очевид но в результате возрастной миграции взрослые особи перемещаются в более глубокие слои почвы (рис. 4, 5, 6).

Анализ количественных изменений популяции X. index по основным фа зам развития виноградной лозы и сезонам года выявил два пика численности:

весенний, ярко выраженный (март–апрель), и менее выраженный осенний (октябрь). Эти пики совпадают с фазами сокодвижения и полной физиологи ческой зрелости ягод. Нематоды обнаружены во всех обследованных горизон тах почвы, однако в максимальном количестве они накапливаются на глубине 21–40 см, очевидно за счет более благоприятных для ксифинем условий пита ния и развития (оптимальная влажность, обилие мелких корешков и пр.).

Абсолютная численность ксифинем понижается с увеличением глубины почвенного горизонта, однако возрастает процентное отношение взрослых особей в популяции.

Согласно нашим наблюдениям, яйцекладка ксифинем в основном прихо дится на апрель-июнь;

она имеет место также осенью, но в незначительном количестве. Следовательно, в течение вегетационного периода винограда ос новная масса паразитов развивается только в одной генерации.

Максимальная численность ксифинем исследованного вида обнаружена на глубине 21–40 см весной и осенью. Отсюда следует, что обследование виноградников на наличие нематод целесообразно проводить именно в эти периоды и отбирать почвенные пробы на глубину не менее 40 см.

Полученые в настоящей работе сведения о биологических особенностях X. index могут быть использованы для организации контроля и мер борьбы с этим опасным паразитом винограда.

Акопян К.В. Биоэкология и вредоносность паразитических нематод винограда в Армении и тео ретическое обонование мер борьбы с ними: Автореф. дис.... канд. биол. наук. 1991. 133 с.

Вайшер Б., Браун Д. Дж. Ф. Знакомство с нематодами: Общая нематология. С.: М. Пенсофт, 2001. 206 с.

Кралль Э.Л. Фитогельминты как инокуляторы вирусных болезней растений и их распростра нение в СССР // Изв. АН ЭССР. Сер. биол. наук. 1965. № 1. Ц. 28–35.

Романенко Н.Д. Фитогельминты – вирусоносители семейства Longidoridae. М.: Наука, 1993.

284 с.

Стегареску О.П. Нематоды – вирусоносители семейства Longidoridae. Род Xiphinema. Киши нев, Штиинца, 1980. 237 с.

Hewitt W.B., Raski D.J., Goheen A.C. Nematode vector of soil – borne fanleaf virus grapevines // Phytopathology, 1958. V. 48. P. 586–595.

Rumpenhorst N., Weischer B. Histopathological and histochemical studies on grapevine roots damaged by Xiphinema index // Rev. de Nematologie, 1978. V. 1. P. 217–225.

ФилоГеНеТиЧесКие оТНошеНиЯ НеМАТод (RHAbdITIdA, sTRONgyLOIdEA) По реЗУльТАТАМ АНАлиЗА ITs-УЧАсТКА рибосоМАль А.П. АКсёНов, д.Н. КУЗНеЦов, с.Э. сПиридоНов Стронгилиды представляют собой одну из наиболее успешных в эволю ционном отношении групп паразитических нематод. Значительное их раз нообразие побудило исследователей ХХ в. к выделению этих нематод в от дельный отряд Strongylida Railliet et Henry, 1913, хотя черты значительного морфологического сходства со свободноживущими нематодами-рабдитидами были очевидны уже давно. Широкое внедрение в практику систематики не матод молекулярных методов вновь поставило вопрос о статусе стронгилид как единой группы, поскольку было обнаружено, что по данным анализа ри босомальных последовательностей стронгилиды представляют собой одну из ветвей рабдитид (Aleshin et al., 1998;

Blaxter et al., 1998;

Sudhaus, Fitch, 2001). Были выявлены определенные филогенетические связи стронгилид с почвенными энтомопатогенными нематодами семейства Heterorhabditidae Poiner, 1975.

Эти представления о родственных связях стронгилид нашли отражение в системе класса нематод предложенной П. Де Леем и М. Блакстером (De Ley, Blaxter, 2002). В этой системе ранг стронгилид был понижен до надсемейства Strongyloidea Weinland, 1858 в составе отряда Rhabditida Chitwood, 1933. Вы делявшиеся в составе стронгилид надсемейства были понижены до семейств:

Strongylidae Baird, 1853;

Trichostrongylidae Leiper, 1912;

Metastrongylidae Leiper, 1908 и Ancylostomatidae Looss, 1905. При этом в это же надсемейство этими авторами включено и семейство Heterorhabditidae Poinar, 1975. Такие изменения ранга для стронгилид стали компромиссом между кладистическим и традиционным подходом, и не затронули «внутреннюю» таксономическую структуру семейства Trichostrongylidae. Объектом нашего исследования были в основном нематоды подсемейства Ostertagiinae Lopez-Neyra, 1947 – широко распространенные паразиты сычуга и тонкого кишечника жвачных.

Стронгилиды в целом и трихостронгилиды в частности стали объектом приложения молекулярных методов уже в самом начале их появления в не матодологии. Филогенетическим отношениям стронгилид было посвящено немало публикаций ведущих специалистов (Gasser, Newton, 2000;

Gasser, 2001;

Chilton et al., 2001), но наиболее масштабным исследованием нам представляется исследование Чилтона с соавторами, охватившее все основ ные группы стронгилид (Chilton et al., 2006). Ими были получены полные Центр паразитологии ИПЭЭ РАН последовательности большой субъединицы рибосомы (28S или LSU rDNA) для более чем 30 видов стронгилид. Несмотря на значительный вклад этого исследования в понимание эволюции стронгилид, его авторы отмечают высо кую степень консервативности последовательности 28S у трихостронигилид.

Ранее такой же вывод был сделан и о филогенетической информативности последовательности малой субъединицы – 18S или SSU rDNA (Blaxter et al., 1998). Завершая обзор филогении стронгилид, Чилтон с соавторами предпо ложили, что менее консервативные последовательности, такие как ITS-участ ки рибосомальной ДНК, могут оказаться более информативным источником филогенетического сигнала (Chilton et al., 2006). В нашем исследовании мы использовали ITS-последовательности нематод подсемейства Ostertagiinae и некоторых родственных им форм для реконструкции их эволюционного раз вития и выяснения филогенетических связей.

Материал для исследования был собран при гельминтологических вскры тиях жвачных животных в различных регионах России, а также в Монголии и во Вьетнаме. Нематоды были извлечены из сычуга и законсервированы в 96% этаноле. Для определения таксономической принадлежности приго тавливали тотальные препараты нематод с применением 20% глицерина. В данном исследовании использованы самцы нематод, так как дифференциа ция самок большинства видов трихостронгилид жвачных затруднена из-за их большой морфологической схожести. Таксономическую принадлежность нематод определяли по морфологическим особенностям половой системы с использованием собственной методики и данных, представленных в лите ратуре (Ивашкин и др., 1971, Кузнецов, 2006). Нематоды рода Graphidium от кроликов были любезно предоставлены профессором М.-К. Дюре-Дессе (Marie-Claude Durette-Desset, лаборатория биологии паразитов, Националь ный музей естественной истории, Франция) (табл. 1).

Выделение ДНК из нематод производилось несколькими методами. ДНК выделяли из нескольких нематод (5-20 особей в зависимости от размера) с помощью набора фирмы «Promega» (Wizard® SV Genomic DNA Purification System) по протоколу производителя, а также из индивидуальных особей с использованием протеиназы К по методу Холтермана и др. (Holterman et al., 2006) и по методу Далласа и др. (Dallas et al., 2000).

Последовательность ITS-участка рибосомальной ДНК (ITS1+5.8S+ITS2) получали с использованием праймеров AB 28 (5'-ATA-TGC-TTA-AGT-TCA GCG-GGT-3') и TW 81 (5'-GTT-TCC-GTA-GGT-GAA-CCT-GC-3'). ПЦР про водили по следующей схеме: первичная денатурация ДНК при 94 °С в тече ние 3 мин, после чего 9 циклов, состоящих из денатурации при 94 °С 1 мин, отжига при 55 °С 1 мин 30 с и элонгации цепи при 72 °С 1 мин 30 с. После этого следующие 24 цикла, состоящие из денатурации при 94 °С в течение с, отжига при 57 °С 1 мин и элонгации цепи при 72 °С 1 мин 20 с. Реакция завершалась финальной элонгацией при 72 °С в течение 5 мин. Очистку ДНК проводили с помощью набора фирмы «Promega» (Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System) по протоколу фирмы-производителя. После этого образцы исследованные виды нематод Ostertagia оstertagi Stiles, 1892 Бизон Приокско-Террасный Март Ostertagia lyrata Sjoberg, 1926 Бизон Приокско-Террасный Март Ostertagia gruehneri Skrjabin, 1929 Северный Алданский р-н, Якутия Июль Ostertagia antipini Matschulsky, 1950 Лось Завидово, Тверская Октябрь Mazamastrongylus dagestanica Altaev, Лось Завидово, Тверская Октябрь Teladorsagia circumcincta Stadelman, Северный Момский р-н, Якутия Май Teladorsagia circumcincta Stadelman, Домашняя Кировская обл. (Рос- Декабрь Teladorsagia trifurcata Ransom, 1907 Северный Момский р-н, Якутия Май Orloffia bisonis Chapin, 1925 Домашняя Восточная Монголия Июль Orloffia kasakhstanica Dikov et Nekipelo- Домашняя Восточная Монголия Июль Marshallagia mongolica Shumakovitsch, Домашняя Восточная Монголия Июль Marshallagia marshalli Ransom, 1907 Овца Московская обл. (Рос- Октябрь Marshallagia occidentalis Ransom, 1907 Овца Московская обл. (Рос- Октябрь Haemonchus contortus Rudolphi, 1802 Коза Центральная Монго- Сентябрь Mecistocirrus digitatus Linstow, 1906 Корова Северный Вьетнам Июль Trichostrongylus probolurus Railliet, 1898 Коза Восточная Монголия Июль Trichostrongilus colubriformis Giles, 1892 Овца Московская обл. (Рос- Сентябрь Trichostrongylus axei Cobbold, 1879 Овца Московская обл. (Рос- Сентябрь Nematodirus helvetianus May, 1920 Корова г. Сочи, Краснодар- Июль ДНК переосаждали этанолом в присутствии ацетата аммония и отправляли для секвенирования в ЦКП «Геном».

Выравнивания нуклеотидных последовательностей получали в програм ме Clustal X (Thompson et al., 1997). Анализ выравниваний проводили при различных алгоритмах в программе PAUP 4.0b10 (Swofford, 2002). Филоге нетические деревья рассматривали с помощью программы TreeView 1.6. (Page, 1996).

Таблица использованные при проведении анализа последовательности стронгилид из Ген банка (NCbI genbank) В таблице 2 приведен список видов остертагиин и других стронгилид, для которых из Генбанка (NCBI GenBank) были получены нуклеотидные по следовательности ITS-участка.

Результаты филогенетического анализа методом максимальной экономии (=максимальной парсимонии) представлены на рис. 1. При проведении дан ного анализа нами были сделаны попытки использования в качестве внеш ней группы сравнения разных нематод, а именно нематод из родов Chabertia Railliet et Henry, 1909;

Necator Stiles, 1903;

Ancylostoma (Dubini, 1843) Creplin, 1845. Сравнение полученных деревьев показало, что выбор внешней группы сравнения среди трёх упомянутых форм не оказывает существенного влия ния на форму кладограммы. В дальнейшем в качестве группы сравнения ис пользовалась последовательность для нематод Chabertia. Значительная часть узлов данной кладограммы имеет высокие показатели bootstrap- поддержки, так что можно говорить, что определённые филогенетические связи на ба зальном уровне филогении трихостронгилид оказываются разрешёнными.

Значительная часть изученных нами остертагиин объединяется в единую группу, к которой относятся роды Ostertagia Ransom, 1907;

Marshallagia Orloff, 1933;

Orloffia Drozdz, 1965;

Teladorsagia Andreeva et Satubaldin, 1954.

Все эти 4 рода объединяются в нашей кладограмме с достаточно высоким уровнем bootstrap-поддержки (91%), а каждый из этих родов по отдельности обычно имеет максимальное значение bootstrap-поддержки (100%). Данная группа из четырех родов остертагиин объединяется с другой эволюционной линией, состоящей из представителей двух подсемейств: Trichostrongylinae Leiper, 1908 и Haemonchinae Skrjabin et Schulz, 1952. Однако представители этих двух подсемейств объединяются между собой с достаточно невысоким уровнем bootstrap-поддержки, а узел, объединяющий трихостронгилин, ге монхин и остертагиин, всегда характеризуется низким уровнем поддержки (58%). Часть нуклеотидных последовательностей, относящихся к подсе мейству Ostertagiinae (а именно, полученные нами из Генбанка данные для Spiculopteragia Orloff, 1933, Skrjabinagia (Kassimov, 1942), а также полученные рис. 1. Филогенетическое дерево построенное по алгоритму максимальной экономии (50% majority rule). (1000 bootstrap-повторов;

из 1058 признаков: 326 постоянных, 455 – информа тивных;

«отсутствие нуклеотида как пятый нуклеотид»). Значения bootstrap-поддержки указа ны у соответствующих узлом К – Кировская область;

М – Момский район;

comb-нуклеотидная последовательность получена пу тем комбинирования данных по Spiculopteragia asymmetrica из ГенБанка (номер AF 480617 и AF 480615) нами самостоятельно данные для Mazamastrongylus dagestanica), не объеди няются в нашей кладограмме с основным стволом остертагиин, а образуют единую независимую эволюционную линию с высоким уровнем bootstrap поддержки. К этой же эволюционной линии тяготеет и последовательность, полученная нами для нематод рода Graphidium Railliet et Henry, 1909 от кро ликов. Представители рода Cooperia Ransom, 1907 образуют отдельную хо рошо поддерживаемую группу в пределах нашего анализа и объединяются со всеми упомянутыми выше остертагиинами, трихостронгилинами и гемо нхинами в единую группу с максимальным уровнем bootstrap-поддержки. С базальным узлом для этой большой группы связаны и нематоды Nematodirus helvetianus.

Результаты филогенетического анализа методом связывания ближайшего соседа представлены на рис. 2. В данном филогенетическом дереве, в отличие от дерева, построенного методом максимальной экономии, разрешёнными оказываются почти все внутренние узлы. При этом общая структура данного филогенетического дерева в значительной степени напоминает результаты, полученные с помощью предыдущего метода анализа. Также можно видеть, что нематоды родов Ostertagia, Marshallagia, Orloffia, Teladorsagia объединя ются воедино с достаточно высоким уровнем bootstrap-поддержки. Следую щий уровень филогенетических узлов оказывается не разрешенным, и отдель ные ветви эволюции стронгилид «коллапсируют». На образовавшемся уровне имеются отдельные ветви, ведущие к упоминавшейся ранее группе из трех родов остертагиин (Spiculopteragia, Skrjabinagia, Mazamastrongylus), а также Graphidium;

отдельной ветвью представлено подсемейство Trichostrongylinae и отдельной же ветвью представлено подсемейство Haemonchinae. В этом смысле «коллапс ветвей» на данном уровне соответствует результатам ана лиза методом максимальной экономии, где также узлы данного уровня от личались невысоким уровнем bootstrap-поддержки. Единую группу со 100% bootstrap-поддержкой образуют упомянутые формы, а также Cooperia, а с ба зальным для всех упомянутых таксонов узлом связаны при 100% поддержке нематоды N. helvetianus.

Результаты филогенетического анализа методом максимального правдо подобия представлены на рис. 3. В отличие от двух предыдущих методов ана лиза, большая часть внутренних узлов данной кладограммы характеризуется невысоким уровнем bootstrap-поддержки. В этом смысле можно говорить, что метод максимального правдоподобия не разрешает внутренних филоге нетических узлов. Тем не менее можно видеть, что данный метод филогене тического анализа выявляет в пределах нашей выборки всё те же основные эволюционные линии. Так с высоким уровнем bootstrap-поддержки обособ ляются роды Ostertagia, Teladorsagia, Orloffia и Marshallagia. Последние два рода объединяются между собой с высоким уровнем поддержки. Узел, объ единяющий все эти четыре рода, отличается очень низкой bootstrap-поддерж кой. Следует также отметить, что внутрь данной филогенетической линии остертагиин попадают и трихостронгилины. Представители подсемейства Haemonchinae оказываются сестринской группой всем упомянутым выше остертагиинам и трихостронгилинам, однако объединение Haemonchinae с ними также поддерживается невысоким уровнем bootstrap-поддержки. Как и в предыдущих методах анализа, отдельную эволюционную линию составляют рис. 2. Филогенетическое дерево, построенное по алгоритму присоединения ближайшего соседа. (1000 boostrap-повторов;

из 1058 признаков: 518 постоянных, 377 – информативных;

«отсутствие нуклеотида – отсутствие данных»). Значения bootstrap-поддержки указаны у со ответствующих узлов К – Кировская область;

М – Момский район;

comb-нуклеотидная последовательность получена пу тем комбинирования данных по Spiculopteragia asymmetrica из ГенБанка (номер AF 480617 и AF 480615) рис. 3. Филогенетическое дерево, построенное по алгоритму максимального правдоподобия.

(Модель эволюции – GTR+G+I, доля инвариантных сайтов 0.233, 100 bootstrap-повторов). Зна чения bootstrap-поддержки указаны у соответствующих узлов К – Кировская область;

М – Момский район;

comb-нуклеотидная последовательность получена пу тем комбинирования данных по Spiculopteragia asymmetrica из ГенБанка (номер AF 480617 и AF 480615) рис. 4. Филогенетическое дерево, построенное методом Байесова анализа. (Модель эволю ции – GTR+G+I;

4 Марковские цепи, 2000 000 генераций, подбор деревьев посте каждых генераций, удаление первых 20000 деревьев). Значения апостериорной вероятности указаны у соответствующих узлов К – Кировская область;

М – Момский район;

comb-нуклеотидная последовательность получена пу тем комбинирования данных по Spiculopteragia asymmetrica из ГенБанка (номер AF 480617 и AF 480615) представители следующих родов остертагиин: Spiculopteragia, Skrjabinagia, Mazamastrongylus. В кладограмме, построенной методом максимального правдоподобия, не выявляется какого-то ни было объединения Graphidium с этими тремя родами остертагиин. Все названные представители семейства Trichostrongylidae, а также Cooperia составляют единую эволюционную груп пу со средним уровнем bootstrap-поддержки (78%).

Результаты изучения имеющихся у нас последовательностей трихострон гилид с помощью Байесова анализа представлены на рис. 4. Цифровые зна чения, указанные у каждой из ветвей, соответствуют так называемой обрат ной вероятности (posterior probability). Именно таким образом оценивается статистическая поддержка ветвей в Байесовом анализе. Можно видеть, что в отличие от предыдущего метода максимального правдоподобия, также осно ванного на использовании моделей эволюции, уровень статистической под держки ветвей в кладограмме, построенной на основании Байесова анализа, значительно выше. Мы находим всё те же основные эволюционные линии остертагиин, что и в предыдущих методах анализа. Отдельные эволюцион ные ветви ведут к родам Ostertagia с поддержкой 99% обратной вероятности, Teladorsagia (100%), Orloffia (100%), Marshallagia (99%). Как и в предыду щих методах анализа, Orloffia и Marshallagia объединяются воедино, и к ним, правда с очень низким уровнем поддержки, тяготеет Teladorsagia. Как и в предыдущем методе анализа, представители рода Trichostrongylus подсемей ства Trichostrongylinae оказываются внутри единой группы из остертагиин, причём такая эволюционная линия, состоящая из трихостронгилин и остер тагиин, имеет достаточно высокий уровень обратной вероятности – 95%. Так же, в соответствии с результатами анализа всеми предыдущими методами, гемонхины объединены с трихостронгилинами и остертагиинами. Сестрин ской группой для этих трех подсемейств оказывается Cooperia.

Нуклеотидные последовательности ITS rDNA не являются кодирующи ми, а лишь способствуют формированию правильной вторичной структуры РНК при построении рибосомы. Элиминирующий отбор для этих спейсер ных последовательностей оказывается не столь жестким как для осталь ных, значащих, участков rDNА и именно это определяет высокую изменчи вость этого участка. Поскольку такие участки rDNA, как SSU (18S) и LSU (28S), оказались непригодными для построения филогении трихостронги лид на уровне подсемейств, было предпринято изучение полных ITS-по следовательностей. При выборе внешних групп сравнения (outgroups) была сделана попытка использования нескольких представителей двух других надсемейств стронгилид, что на наш взгляд позволяет минимизировать воз можные искажения, связанные с неподходящим представителем внешней группы. Филогенетические деревья, полученные с использованием четырех различных методов анализа, оказались достаточно сходными между собой.

Лишь в некоторых видах анализа разрешенными оказывалось большинство внутренних узлов дерева. В то же время топология этих деревьев была почти идентична.

рис. 5. Наложение морфологических признаков стронгилид на консенсусное филогенетиче ское дерево, построенное по результатам филогенетического анализа последовательностей ITS1+5.8S+ITS2 rDNA 1 – если тип бурсы 2-2-1;

2 – пузыревидное кутикулярное покрытие на головном конце (cephalic bulb);

3 – слияние спикул в «ланцет»;

4 – луч бурсы 2 меньше луча 3;

5 – миниатюризация стомы;

6 – концы лучей бурсы 2 и 3 сближены;

7 – раздвоение преклоакальной папиллы (половой конус);

8 – веерообразная мембрана на спикулах;

9 – тип бурсы 2-1-2;

10 – лучи бурсы 5 и 6 слиты или парралельны;

11 – укрупнение стомы;

12 – тип бурсы 1-2-2;

13 – тип бурсы 1-3-1;

14 – дистанция м/у лучами бурсы и 3 больше, чем между 3 и 4;

15 – отсутствие проконуса;

16 – имеется рулёк;

17 – расщепление дисталь ного конца спикул (от 2 до 3 отдельных отростков, но не гребни и не «веер»);

18 – нерасщеплённость дистального конца спикул На рис. 5 представлено консенсусное филогенетическое дерево, постро енное по результатам сравнения деревьев полученных всеми четырьмя ме тодами. Именно на него нами были «наложены» морфологические признаки собранные как в процессе собственной работы по данной группе, так и по черпнутые из литературных данных. В качестве морфологических характе ристик были использованы как признаки с бинарными состояниями, так и имеющие несколько состояний (например, особенности организации поло вой бурсы представленные в виде краткой формулы, отражающей располо жение лучей бурсы со 2-го по 6-й). Использованные для совместного анализа морфологических и молекулярных данных признаки были нанесены на фи лограмму как в качестве синапоморфий (признаков, объединяющих между собой несколько таксонов), так и аутапоморфий – признаков, характеризую щих уникальность какого-то терминального таксона (Павлинов, Любарский, 2011). В базальной части этого филогенетического древа представлены пред ковые состояния признаков, как о них можно судить по строению ближайших свободноживущих и почвенных родственных форм. На рис. 5. можно видеть, что для некоторых из групп, характеризующихся высоким уровнем bootstrap поддержки в большинстве или во всех методах анализа, обнаруживаются на дежные синапоморфии. Так, для поддержки единой группы из трех родов подсемейства Haemonchinae имеется по крайней мере три синапоморфии (бурса с формулой 2-1-2, слияние лучей 5 и 6, увеличенная стома). Нема лым оказывается и число синапоморфий для трех видов рода Trichostrongylus Looss, 1905 (представлен на нашей схеме одинарной ветвью, как и осталь ные роды, для которых исследовано несколько видов). Синапоморфией для всех Trichostrongylidae может стать лишь признак миниатюризации стомы.

Более сложным представляется вопрос о синапоморфиях, характеризующих срединные узлы нашего филогенетического дерева.

Нематоды подсемейства Ostertagiinae характеризуются расщеплением дистальной части спикулы с образованием нескольких отростков сложной формы и в разной степени изогнутых. Нематоды рода Nematodirus Ransom, 1907, которые в соответствии с современными таксономическими представ лениями относятся к семейству Molineidae Durette-Desset et Chabaud, 1977, занимают в наших филограммах базальное положение по отношению к Trichostrongylidae. Спикулы этих нематод дистально объединяются, образуя общий нерасщепленный ланцетовидный конец. Отдельные спикулы с оди нарной оконечностью характерны и для энтомопатогенных Heterorhabditidae, а также почвенных Rhabditidae Oerley, 1880, которых рассматривают в каче стве формы, близкой к предковой для всех Strongyloidea (Blaxter et al., 1998).

В таком случае правильным было бы считать именно такое состояние пред ковым, а усложнение строения спикулы (расщепления, изгибы) рассматри вать как вторичное изменение. При этом оказывается, однако, что наложе ние признака «расщепление дистальной части спикулы» на полученное нами филогенетическое древо выявляет независимое его появление в рамках из учаемой группы. Другим примечательным случаем параллельного развития является восстановление рулька в двух линиях трихостронгилид, а именно у Ostertagiinae и Graphidium.

Привлеченные нами для анализа морфологические данные не позволя ют выявить синапоморфии для всегда имеющей высокую поддержку группы Spiculopteragia + Skrjabinagia + Mazamastongylus. Для единой группы, объ единяющей эти три рода с родом Graphidium, единственной синапоморфией служит признак явного сближения (наклона друг к другу) оконечностей бур сальных лучей 2 и 3. Дюрре-Дессе с соавторами (Durette-Desset et al., 1999) рассматривают этот признак, как несомненно важный и использовали его при проведении филогенетического анализа этой группы по морфологическим признакам.

Наиболее ярким противоречием между полученными нами молекуляр ными данными и устоявшимися представлениями о составе подсемейства Ostertagiinae стало разделение исследованных родов, номинально относя щихся к этому подсемейству, на две линии. Одна из них представляла фор мы, близкие типовому роду, другая (в составе Spiculopteragia, Skrjabinagia, Mazamastongylus) никогда не показывала связи с этой основной группой.

Нанесение на полученные филогенетические деревья морфологических при знаков (mapping) выявило лишь несколько особенностей строения упомяну тых нематод, которые могли бы поддержать такое неожиданное разделение.

Безусловно, к таким признакам можно отнести синапоморфию наличия раз двоенного полового конуса (непарной преклоакльной папиллы) у Ostertagia, Marschallagia, Orloffia и Teladorsagia, а также признак «сближение оконеч ностей бурсальных лучей r2 и r3» для Spiculopteragia, Mazamastrongylus и Skrjabinagia. Неплохой синапоморфией для первой группы было бы восста новление (реституция) рулька, но он отмечен и для Graphidium. Другим яр ким параллелизмом между двумя сравниваемыми группами оказывается рас щепление дистальной оконечности спикулы на несколько отростков.

Анализ данных лишь одного домена ДНК не может дать окончательный ответ – представляют ли эти две группы родов две группы с параллельным формированием сходных признаков (и тогда эти признаки представляют со бой гомоплазии), или же это артефакт, связанный с высокой изменчивостью и скоростью эволюции ITS-участка ДНК. Мы склоняемся к первому вариан ту. Объединение всех этих родов в единую группу было связано, вероятно, с независимым формированием в пределах каждой из этих эволюционных линий сходных морфологических признаков. В то же время, лишь получе ние дополнительных данных по другим информативным доменам, а также существенное расширения круга видов с известными последовательностями может внести ясность в этот вопрос.

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ 11-04-00590а.

Ивашкин В.М., Контримавичус В.Н., Назарова Н.С. Методы сбора и изучения гельминтов на земных млекопитающих. М.: Наука, 1971. 124 с.

Кузнецов Д.Н. Методика дифференциации нематод подсемейства Ostertagiinae // Тр. Всерос.

ин-та гельминтологии. 2006. Т. 43. С. 271–278.

Павлинов И.Я., Любарский Г.Ю. Биологическая систематика: эволюция идей. М.: Товарищест во научных изданий КМК, 2011. 667 с.

Aleshin V.V., Kedrova O.S., Milyutina I.A. et al. Secondary structure of some elements of 18S rRNA suggests that strongylid and a part of rhabditid nematodes are monophyletic // FEBSLetters.

1998. Vol. 429, N1. P. 4–8.

Blaxter M.L., De Ley P., Garey, J.R. et al. A molecular evolutionary framework for the phylum Nematoda // Nature. 1998. Vol. 392. P. 71–75.

Chilton N. B., Huby-Chilton F., Gasser R.B., Beveridge I. The evolutionary origins of nematodes within the order Strongylida are related to predilection sites within hosts // Molecular Phylogenetics and Evolution. 2006. Vol. 40. P.118–128.

Chilton N.B., Newton L.A., Beveridge I., Gasser R.B. Evolutionary Relationships of Trichostrongyloid Nematodes (Strongylida) Inferred from Ribosomal DNA Sequence Data // Molecular Phylogenetics and Evolution. 2001. Vol. 19, N 3. P. 367–386.

Gasser R.B. Molecular taxonomic, diagnostic and genetic studies of parasitic helminthes // Int. J.

Parasitol. 2001. Vol. 31. P. 860–864.

Dallas J.F., Irvine R.J., Halvorsen O. DNA evidence that Ostertagia gruehneri and Ostertagia arctica (Nematoda: Ostertagiinae) in reindeer from Norway and Svalbard are conspecific // Int. J.

Parasitol. 2000. Vol. 30. P. 665–668.

Durette-Desset M.C., Hugot J.P., Darlu P., Chabaud A.G. A cladistic analysis of the Trichostrongyloidea (Nematoda) // Int. J. Parasitol. 1999. Vol. 29. P. 1065–1086.

Gasser R.B., Newton S.E. Genomic and genetic research on bursate nematodes: significance,implications and prospects // Int. J. Parasitol. 2000. Vol. 30. P. 509–534.

Holterman M.,Wurff A., Elsen S. et al. Phylum-Wide Analysis of SSU rDNA Reveals Deep Phylogenetic Relationships among Nematodes and Accelerated Evolution towards Crown Clades // Mol. Biol. Evol. 2006. Vol. 23, N 9. Р. 1792–1800.

Hoste H., Chilton, N.B., Gasser R.B., Beveridge I. Differences in the second internal transcribed spacer (ribosomal DNA) between five species of Trichostrongylus // Int. J. Parasitol. 1995.

Vol. 25. P.75–80.

Page R.D.M. TREEVIEW: an application to view phylogenetic trees on personal computer // Cabios.

1996. Vol.12. P. 357–358.

Sudhaus W., Fitch D. Comparative studies on the phylogeny and systematics of the Rhabditidae // J. Nematol. 2001. Vol. 3, N 1. P. 1–70.

Swofford D.L. PAUP*. Phylogenetic analysis using parsimony. Version 4. Sunderland. Massachusetts.

Sinauer Associates. 1998. 128 p.

Thompson J.D., Gibson T.J., Plewniak F. et al. The CLUSTAL X windows interface: Flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools // Nucleic Acids Research.1998.

Vol. 25. P. 4876–4882.

Zarlenga D.S., Stringfellow F., Nobary M., Lichtenfels J.R. Cloning and sequence analysis of the small subunit ribosomal RNA gene from three species of Haemonchus (Nematoda: TRichostrongyloidea) and identification of PCR primers for rapid differentiation // Experimental Parasitology. 1994.

Vol. 78, N 1. P. 28–36.

Zarlenga D.S., Hoberg E.P., Stringfellow F., Lichtenfels J.R. Comparisons of two polymorphic species of Ostertagia and phylogenetic relationships within the Ostertagiinae (Nematoda, Trichostrongyloidea) inferred from ribosomal DNA repeat and mitochondrial DNA sequences // J. Parasitol. 1998. Vol. 84, N 4. P. 806–812.

ФУНКЦиоНАльНАЯ МорФолоГиЯ и УльТрАсТрУКТУрА сПерМАТоЗоидов двУх родсТвеННЫх видов ТреМАТод сеМеЙсТвА ECHINOsTOmATIdAE При электронномикроскопических исследованиях сперматозоидов двух родственных видов трематод изучены особенности ультраструктурной орга низации всех отделов мужских гамет. Установлено, что сперматозоиды отно сятся к модифицированному гамет. На основании исследования предложены схемы организации гамет изученных трематод.

Ключевые слова: сперматозоиды гамет трематод, осевые структуры спер матозоидов, ядро, митохондрии.

Традиционно морфологические исследования проводятся на свободно живущих организмах. Функциональная морфология паразитических орга низмов изучена в меньшей степени. Так, например, в составе современной фауны класса Trematoda, типа Plathelminthes насчитывается сегодня около 4000 видов, а исследования морфологических и ультраструктурных особен ностей органов, тканей и их отдельных структур коснулись не более чем, 40 – 50 видов. Настоящая работа посвящена электронно-микроскопическому изучению мужских гамет двух родственных видов сосальщиков.

Для исследования ультраструктуры и морфофункциональных особенно стей сперматозоидов были взяты два вида трематод Hypoderaeum conoideum [Bloch, 1782] из кишечника утки кряквы (Anas platyrhynchos) и Echinostoma revolutum [Frohlich, 1802] из кишечника домашней утки (Anas platyrynchos domesticus), оба гельминта относятся к семейству Echinostomatidae [Dietz, 1909] подотряда Fasciolata.

Изучение ультраструктуры проводили методом трансмиссионной элек тронной микроскопии (Welsch, Storch, 1976). Ультратонкие срезы готовили по методике Б. Уикли (Уикли, 1975). Для этого взятую ткань фиксировали в забуференном 0,1 М какодилатным буфером (pH 7,4) 1,5–2,5% растворе глю тарового альдегида в течение двух часов при температуре 4 °С. Далее два жды промывали какодилатным буфером (pH 7,4) по 10–15 мин, после чего постфиксировали в 1% растворе четырехокиси осмия (на 0,1 М какодилат ном буфере) в течение двух часов с последующим двукратным отмыванием Павлодарский государственный университет (Ломова 64, 14000, Павлодар, Республика Казахстан E-mail: kanakam61@mail.ru).

какодилатным буфером (по 10–15 мин). Затем материал дегидратировали в этиловых спиртах восходящей концентрации: в 50% спирте – 15–20 мин, в 70% – оставляли на ночь, затем в 80%, 90%, 96% – по 15–20 мин в каждом, в абсолютном спирте или ацетоне – по 20–30 мин дважды.

Дегидратированные препараты заключали в смесь смол эпон-аралдит.

Для этого готовилась смесь смол в следующих пропорциях (Undeen, Varva, 1997).

Эпон 812 – 4 г., Аралдит 502 – 2 г., Эпон DDSA – 9 г. Катализатор DMP-30 – 8 капель. Пропитка препаратов проводилась по следующей схеме:

смесь смол: абсолютный ацетон 1:3 – 4 ч;

смесь смол: абсолютный ацетон 1:1 – 4 ч;

смесь смол : абсолютный ацетон 3:1 – 4 ч;

смесь смол – от 12 до ч;

новая смесь смол в другой посуде – от 12 до 24 ч. Затем препараты перено сились в свежую смесь смол для полимеризации. Полимеризацию проводили в течение 1,5–2 сут. при 60 °С.

Ультратонкие срезы толщиной 60–100 нм готовили на ультратоме «Ultrotome III» (“LKB», Швеция). Полученные срезы наносили на сетки-под ложки с формваровой пленкой-подложкой и контрастировали 2% раствором уранилацетата на 50% этаноле (10–20 мин при 37 °С) и цитратом свинца (от 3 до 10 мин. при комнатной температуре) по E. Reynolds (1963). Получен ные препараты просматривали в электронном микроскопе «JEM-100 CXII»

(«JEOL», Япония) с апертурной диафрагмой 25–30 мкм при ускоряющем на пряжении 80 кВ.

реЗУльТАТЫ собсТвеННЫх исследовАНиЙ В результате ультраморфологических наблюдений сперматозоидов двух родственных видов трематод получены следующие результаты по тонкой ор ганизации гамет.

Ультраструктура сперматозоидов трематоды Головной отдел (рис. 1, А). Ультраструктура головного отдела гаметы включает в себя ядро, одну апикально расположенную осевую структуру, ко торая в дальнейшем по длине гаметы переходит в две раздельные осевые структуры жгутика, здесь же расположен передний конец митохондрии.

Неравномерное распределение осевых структур, возможно, связано с осо бенностями сперматогенеза. Ядро локализуется за апексом головной части сперматозоида. Ядро вытянутое, передний конец его тупо закруглен, задний несколько заострен и вытянут. Размер поперечного сечения ядра 0,5 0, мm, ядро имеет в общем уплощенную форму, повторяя форму всего спер матозоида. Диаметр ядра в задней части составляет 0,28 0,33 мm. Хро матин, находящийся в ядре, представлен плотно упакованными нитчатыми структурами, которые в литературе носят название – ламелл. Чаще всего на электроннограммах хроматин спирально закручен вдоль длинной оси ядра.

В некоторых ядрах ядерное вещество имеет меньшую электронную плот ность, к тому же он не закручен в спираль, вероятно, это вещество является рис 1. Ультраструктура сперматозоидов трематоды H. conoideum в различных отделах А – головной отдел сперматозоида трематоды (24000), Б–Г – головная часть, Д – хвостовая часть в районе осевых структур сперматозоида, Е – зона дифференциации осевой структуры дуплета сперма тозоида, Ж – аксиальная структура сперматозоида. ас – акросома, ax – осевая структура сперматозоида, Cmt – светлая микротубула дуплета, fn – ламеллы ядра сперматозоида, gl – гликоген, gr – терминальные точки дуплетов аксиальных структур, mct – микротубулы, mt – митохондрия, n – ядро, РMt – электронно темная микротубула дуплета, zd – зона дифференцировки дуплетов, dmt – дуплеты аксиальных структур, ЛАФ – связующие центральный стержень и дуплеты тяжи аксиальных структур сперматозоида, СЦ – цен тральный стержень остаточным белком, ранее это предполагалось Silvera, Porter (1968) для дру гих представителей плоских червей из класса турбеллярий. Ядерная мембра на на электроннограммах обычно отделена от уплотненного хроматина узкой электронно-светлой зоной (рис. 1, Б). Одна из осевых жгутиковых структур начинается в конечной зоне головного отдела, рядом с местом расположения ядра, и здесь диаметр его несколько уменьшается (рис. 1, В). На дистальном участке головного отдела осевые жгутиковые структуры локализуются ла терально, близко к плазматической мембране, а ядро занимает центральную часть (рис. 1, Г). Каждая осевая жгутиковая структура имеет диаметр около 0,18–0,20 мm. В составе осевой структуры находится девять двойных мик ротрубочек (дуплетов), расположенных по окружности вокруг центрального комплекса микротрубочек (рис. 1, Д), радиальные комплексы и центральные микротрубочки описываются формулой (9+1). Девять дуплетов соединяются с центральной структурой посредством девяти тяжей, которые имеют боль шую электронную плотность, чем остальная часть полости цилиндра (рис.

1, Д). Вероятно, трубочки в каждом дуплете морфологически не равнознач ны. Одна из них имеет вокруг себя более электронно-плотную зону, другая трубочка в составе дуплета светлая по морфологии и на продольных срезах удлиненная (рис. 1, Д).

Комплекс, расположенный в центре жгутика имеет размер около 0,07–0, мm, он состоит из плотных центральных фибрилл и окружен по периферии кольцеобразными структурами. При этом электронная плотность внешней кольцеобразной структуры соответствует плотности фибрилл, находящихся в центральной части. Внутренняя кольцевая структура более или менее гомо генная и электронно-прозрачная. От центра центральной структуры отходят девять тяжей и присоединяются к внешней, радиально расположенной тру бочке, имеющей большую электронную плотность, как представлено на схе ме сделанной по итогам наблюдении серийных срезов (рис. 3, А). Длина тя жей, соединяющих центральную структуру с трубчатыми микротубулярными комплексами (дуплетами), которые расположены по периферии, равна около 0,04 мm. Дифференцировка дуплетов начинается с терминальных точек в ос новании головной части гаметы (см. рис. 1, Е). По мнению Rees (1979), тяжи, соединяющие центральные и периферические микротубулярные структуры, располагаются по спирали, по крайней мере, у трематоды Cryptocotyle lingua (сем. Heterophydae). По нашему мнению, это обстоятельство объясняет то, что на противоположной стороне иногда в поперечном сечении тяжи выпук лые.

При изучении радиальных и центральных микротубулярных структур жгутиков установлено, что они не имеют четких границ и для них характерна зернистость (рис. 1, Ж).

Следующая субклеточная структура головной части сперматозоида тре матоды – митохондрия (см. рис. 1, А). Митохондрия локализуется рядом с яд ром, его верхний конец начинается несколько ниже от переднего конца ядра и располагается рядом с единственным в этой зоне жгутиком. В зоне, где появ ляется второй жгутик, митохондрия расположена рядом с ядром посередине жгутиков. Sato, Sakoda (1967), изучая трематоду Paragonimus myazakii (сем.

Paragonimidae), пришли к мнению, что митохондрия расположена вентраль нее к ядру, параллельно длинной оси сперматозоида. У изучаемого нами вида рис. 2. Схема строения сперматозоида трематоды H.conoideum А – схема строения осевых структур трематоды, Б – схема строения сперматозоида трематоды в различ ных его зонах (А – схема в зоне одной осевой структу ры, В – схема зоны выше окончания жгутика, С – схема в зоне ядра, D – схема в зоне ядра и митохондрии, Е – в зоне двух осевых структур, F – в зоне осевых струк тур и митохондрии, G – в зоне двух осевых структур, Н – в средней части жгутика, J – схема жгутика ближе к окончанию, К – схема концевой части жгутика), В – схема строения сперматозоида трематоды на границе головного и среднего отделов. nm – мембрана ядра, pm – плауматическая мембрана сперматозоида, az – зона сближения осевых структур хвостовой части сперматозоида. Остальные обозн.: см. рис. митохондрия расположена непосредственно под плазматической мембраной на дорсальной и вентральной частях, в общем, она занимает центральную часть в отделе с двумя осевыми структурами.

На переднем конце, где диаметр ядра наибольший и присутствует одна осевая структура, имеются микротрубочки, собранные в две группы. По-ви димому, они выполняют функцию цитоскелета. Такая скелетная функция вполне оправдана для тонкой, длинной и изящной клетки, каким являются сперматозоиды трематод. Rees (1979) отмечает присутствие связей между микротрубочками и плазматической мембраной в развивающихся спермати дах.

В описываемом отделе рибосомы, равно как и полирибосомы, а также аппарат Гольджи отсутствуют. В этой части гаметы обнаружены зерна глико гена (см. рис. 1, Ж), согласно исследований Anderson, Personne (1970), Silvera (1968), зерна представлены b-гликогеном. Зерна b-гликогена в головном от деле гаметы многочисленны и встречаются вблизи ядра и митохондрии. На нижней стороне головного отдела присутствуют конические структуры, ко торые окружают апикальные части жгутиков, микротрубочек, их около 20-ти (см. рис. 1, Д). По мере увеличения диаметра окружности головного выроста, по-видимому, формируется полукруг из микротрубочек вокруг прилегающей цитоплазмы, передняя часть головного выроста расширяется и полностью сливается с апексом головного отела. Верхняя граница ядра лежит непосред ственно близко к плазматической мембране. На уровне верхнего конца ядра микротрубочки разделены на дорзальные и вентральные группы примерно 5–6 в каждой, которые потом становятся в дорсальный и вентральные ряды.

Подобное отмечалось ранее Rees (1979) для трематоды C. lingua.

Ультраморфология среднего отдела сперматозоида. Условно средний отдел гаметы можно определить границами, где ориентирами являются зад ний конец ядра и дистальный конец митохондрии. Вероятно, этот отдел име ет достаточно заметную длину, судить сложно, хотя Rees (1979) у C. lingua отмечает его большую протяженность и считает его самой длинной частью гаметы. Диаметр этого отдела несколько меньше, чем диаметр головного от дела. В этом отделе осевых структур – два и они располагаются латерально, центральную часть занимает митохондрия, в цитоплазме присутствуют зерна гликогена.

Задний отдел сперматозоида. Задний отдел включает в свой состав уча сток от заднего конца митохондрии до конца тела сперматозоида. Так как задний конец гаметы заострен, то по мере приближения к нему происходит сближение двух осевых структур жгутиков, поперечное сечение уменьшает ся до отметок 0,35–0,30 мm, на дорсальной и вентральных сторонах появ ляются едва заметные углубления, но в основной массе это углубление на электроннограммах не просматривается. В очень тонком слое цитоплазмы присутствуют зерна гликогена, которые мы склонны определять как зерна b-гликогена (рис. 1, Е). Микротрубочки, расположенные на спинной и вен тральной сторонах, постепенно уменьшаются в количестве, в конце концов, остается одна дорсальная или вентральная микротрубочка, потом и она уже в самом конце тела гаметы исчезает. На внутренней поверхности со спинной и противоположной стороны отмечаются электоронноплотные структуры, при уроченые к участкам между осевыми структурами жгутиков. По-видимому, эти уплотнения появляются на поздних стадиях развития сперматозоида. На участке самого концевого отдела гаметы присутствуют только задние осе вые структуры жгутиков. Здесь осевые структуры резко расширяются. Этот участок отличается от переднего участка головного отдела отсутствием пе риферических микротрубочек. Неравномерность отмечается и в дуплетных структурах, формирующих жгутики. Осевые структуры сближаются на зад нем конце гаметы не симметрично, а ближе к одной из сторон (дорсальной или вентральной).

По результатам изучения электроннограмм всех отделов сперматозоидов трематоды H. conoideum мы схематизировали его общее строение на рисунке схеме (рис. 2, Б). Поскольку особый интерес представляет зона на границе го ловного и среднего отделов сперматозоида трематоды, где встречаются почти все основные ультраструктурные элементы гаметы (ядро, митохондрия, нача ло осевых структур жгутика), то по результатам электронно-микроскопиче ских наблюдений составлена схема этого участка (рис. 2, В).

Таким образом, по результатам ультраструктурных исследований уста новлено, что сперматозоиды трематоды H. conoideum, относятся к группе модифицированных мужских гамет. В структурной организации мужских га мет исследованного паразита выявлены характерные особенности, связанные либо с функциональным назначением, либо с таксономическим положением гельминта.

Ультраструктура сперматозоидов трематоды В сперматозоидах E. revolutum как и других представителей плоских чер вей выделяются головной, средний и задний отделы. Проксимальная часть головного отдела характеризуется присутствием более развитой, чем у H.

conoideum акросомой, на электронномикроскопических снимках в попереч ном сечении описываемый отдел имеет несколько вытянутую гантелевидную форму (рис. 3, А). На периферии проксимальной части сперматозоида, по периметру, расположены микротубулярные структуры, их количество варьи рует от 34 до 46 микротубул.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 13 |
 




Похожие материалы:

«23 - 24 мая 2012 года Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГБОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П.А. Столыпина В мире научных Всероссийская студенческая открытий научная конференция Том II Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГБОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П.А. Столыпина Всероссийская студенческая научная конференция В мире научных открытий Том II Материалы всероссийской студенческой ...»

«Министерство сельского хозяйства РФ Материалы Международной научно-практической конференции АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ АГРОНОМИИ, АГРОХИМИИ И АГРОЭКОЛОГИИ посвященной 70-ти летию со дня рождения доктора сельскохозяйственных наук, профессора, Почетного работника высшего профессионального образования РФ, Заслуженного работника высшей школы РФ, Заслуженного деятеля науки и техники Ульяновской области Куликовой Алевтины Христофоровны Ульяновск – 2012 Материалы Международной научно-практической конфе ...»

«И. Л. Бухарина, А. Н. Журавлева, О. Г. Болышова ГОРОДСКИЕ НАСАЖДЕНИЯ: ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ АСПЕКТ Министерство образования и науки Российской Федерации ФГБОУВПО Удмуртский государственный университет Институт гражданской защиты Кафедра инженерной защиты окружиющей среды И.Л. Бухарина, А.Н. Журавлева, О.Г. Болышова ГОРОДСКИЕ НАСАЖДЕНИЯ: ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ АСПЕКТ Монография Ижевск 2012 1 ББК 20.1(2) УДК 504.5:574 Б 94 Рекомендовано к изданию Редакционно-издательским советом УдГУ Рецензенты: доктор ...»

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Департамент научно-технологической политики и образования ФГБОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Посвящается памяти Людмилы Олеговны Буториной МАТЕРИАЛЫ Всероссийской научной конференции МОДЕРНИЗАЦИЯ В РОССИИ: ТЕХНИЧЕСКИЙ ПРОГРЕСС И СОЦИАЛЬНЫЙ ЖИЗНЕННЫЙ МИР МОЛОДЕЖИ 25 ноября 2011 года Ульяновск - 2011 МОДЕРНИЗАЦИЯ В РОССИИ: ТЕХНИЧЕСКИЙ ПРОГРЕСС И СОЦИАЛЬНЫЙ ЖИЗНЕННЫЙ МИР МОЛОДЕЖИ Министерство сельского хозяйства ...»

«Российская академия сельскохозяйственных наук Государственное научное учреждение ВСЕРОССИЙСКИЙ ИНСТИТУТ АГРАРНЫХ ПРОБЛЕМ И ИНФОРМАТИКИ имени А.А. НИКОНОВА им. .А.А.Никонова НАУЧНЫЕ ТРУДЫ 2009 год Выпуск 27 КОНЪЮНКТУРНЫЙ ОПРОС КРУПНЫХ И СРЕДНИХ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ОРГАНИЗАЦИЙ Москва – 2009 Российская академия сельскохозяйственных наук Государственное научное учреждение ВСЕРОССИЙСКИЙ ИНСТИТУТ АГРАРНЫХ ПРОБЛЕМ И ИНФОРМАТИКИ имени А.А. НИКОНОВА им. .А.А.Никонова НАУЧНЫЕ ТРУДЫ 2009 год Выпуск ...»

«АКАДЕМИЯ НАУК КАЗАХСКОЙ ССР ИНСТИТУТ БОТАНИКИ Б. А. БЫКОВ ГЕОБОТАНИЧЕСНИИ СЛОВАРЬ И З Д А Н И Е ВТОРОЕ, ПЕРЕРАБОТАННОЕ И ДОПОЛНЕННОЕ Издательство Наука К а з а х с к о йС С Р АЛМА-АТА 1973 581 Б—953 УДК 581(03) Книга представляет собой расширенное и пере- работанное издание Геоботанической термино- логии (Алма-Ата, 1967). В ней дано, толкование более 900 геоботанических (фитоценологических) терминов. Для главнейших приведено их понима ние различными авторами. Большинство поня тий сопровождается ...»

«ИНДИЙСКАЯ ПОЭЗИЯ XX ВЕКА Том первый Перевод с разных языков ^§§&) Москва Художественная литература 1990 ББК 84.5Ид И60 Редакционная коллегия: БИРЕНДРА КУМАР ЧЕЛЫШЕВ Е. П. БХАТТАЧАРИЯ АЙТМАТОВ Ч. Т. Р.-М БАКАЯ АНДЖАПАРИДЗЕ Г. А. ГАНГАДХАР ГАДГИЛ ЗАЛЫГИН С. П. АБХАИ МАУРЬЯ КОРОВКИН И. П. ХЕМЧАНДРА ПАНДЕ КУЗНЕЦОВ Ф. Ф. ВИШНУ ПРАБХАКАР ЛЕОНОВ Л. М. РАДХУВИР САХАИ ИНДРАНАТХ ЧОУДХУРИ САЛГАНИК М. Л. Составление, краткие справки об авторах О. Мелентьевой Комментарий О. Мелентьевой и А. Сенкевича ...»

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Материалы II-ой Международной научно-практической конференции Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения 8-10 июня 2010 года Том V АГРОНОМИЯ И АГРОЭКОЛОГИЯ УЛЬЯНОВСК - 2010 Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Материалы II -ой Международной ...»

«^Морфология 6олшебной сказки Ысторические корни волшебной сказки Русская сказка Русский героический эпос Русские аграрные праздники Поэтика фольклора ^1роблелсы кол4.изл*а и cuiexa Сказка. Зпос. $1есня фольклор. Литература. Ыстория Довести. 22невник. Восполсинания .Москва Лабиринт уЫос/сва Лабиринт 2001 Владимир Яковлевич Пропп. Сказка. Эпос. Песня. / Составление, научная редакция, комментарии и указатели В. Ф. Шевченко. — М.: Лабиринт, 2001. — 368 с. — (Собрание трудов). Редактор В. Ф. ...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ СЫКТЫВКАРСКИЙ ЛЕСНОЙ ИНСТИТУТ – ФИЛИАЛ ГОСУДАРСТВЕННОГО ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО УЧРЕЖДЕНИЯ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ЛЕСОТЕХНИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ С. М. КИРОВА КАФЕДРА ВОСПРОИЗВОДСТВА ЛЕСНЫХ КУЛЬТУР ОСНОВЫ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ПОЛЬЗОВАНИЙ Конспект лекций для студентов специальности 250201 Лесное хозяйство всех форм обучения СЫКТЫВКАР 2008 УДК 631.11 ББК 65.321 О-75 Рассмотрен и рекомендован к изданию кафедрой ...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ СЫКТЫВКАРСКИЙ ЛЕСНОЙ ИНСТИТУТ – ФИЛИАЛ ГОСУДАРСТВЕННОГО ОБРАЗОВАТЕЛЬНОГО УЧРЕЖДЕНИЯ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ЛЕСОТЕХНИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ИМЕНИ С. М. КИРОВА КАФЕДРА ВОСПРОИЗВОДСТВА ЛЕСНЫХ РЕСУРСОВ ОХОТНИЧЬЕ-ПРОМЫСЛОВЫЕ ПТИЦЫ РЕСПУБЛИКИ КОМИ Учебное пособие по дисциплинам Биология зверей и птиц, Основы охотоустройства, Техника охоты для студентов специальности 250201 Лесное хозяйство всех форм обучения СЫКТЫВКАР ...»

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Материалы Международной научно-практической конференции АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ АГРАРНОЙ НАУКИ И ОБРАЗОВАНИЯ Том VII СТабилизация и экономичеСкий роСТ аграрного СекТора экономики гуманиТарные науки и образование улЬяновСк - 2009 Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Материалы Международной ...»

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Материалы Международной научно-практической конференции АгрАрнАя нАукА и обрАзовАние нА современном этАпе рАзвития: опыт, проблемы и пути их решения 26-28 мая 2009 года Том I АГРОНОМИЯ И АГРОЭКОЛОГИЯ УЛЬЯНОВСК - 2009 Министерство сельского хозяйства Российской Федерации ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Материалы Международной ...»

«Администрация г. Хабаровска Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тихоокеанский государственный университет ПРОБЛЕМЫ УПРАВЛЕНИЯ ЗЕЛЕНЫМИ НАСАЖДЕНИЯМИ В ХАБАРОВСКЕ Материалы Четвертой городской научно-практической конференции 25 ноября 2009 года Хабаровск Под общей редакцией доктора сельскохозяйственных наук Н.В.Выводцева Хабаровск Издательство ТОГУ 2009 УДК 631.96 (571.62) ББК Н87 + П 237 3 П 781 Проблемы управления ...»

«Нина Молева Сторожи Москвы Сторожи Москвы: ООО Агентство „КРПА Олимп“; Москва; 2007 ISBN 5-7390-1997-4 Аннотация Сторожи – древнее название монастырей, что стояли на охране земель Руси. Сторожа – это не только средоточение веры, но и оплот средневекового образования, организатор торговли и ремесел. О двадцати четырех монастырях Москвы, одни из которых безвозвратно утеряны, а другие стоят и поныне – новая книга историка и искусствоведа, известного писателя Нины Молевой. Нина Михайловна Молева ...»

«Рим Билалович Ахмедов Растения — твои друзья и недруги Растения — твои друзья и недруги: Китап; Уфа; 2006 ISBN 5-295-03886-6 Аннотация В этом издании впервые в отечественной литературе по фитотерапии даются сведения о противопоказаниях лекарственных растений. Рим Ахмедов, автор широко известной книги Одолень-трава, рассматривает более трёхсот растений с их побочными проявлениями, что позволит читателям грамотно, без вредных последствий для здоровья, использовать растительные средства при ...»

«ДЕПАРТАМЕНТ КАДРОВОЙ ПОЛИТИКИ И ОБРАЗОВАНИЯ ПРИ МСХ РФ Министерство сельского хозяйства РФ ФГОУ ВПО Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р. Филиппова Кафедра истории История России Рекомендовано Сибирским региональным учебно-методическим центром высшего профессионального образования для межвузовского использования в качестве учебного пособия для студентов заочной формы обучения Улан-Удэ Издательство ФГОУ ВПО БГСХА им. В.Р. Филиппова 2005 1 I.Особенности исторического ...»

«МИНИСТЕРСТВО ПРИРОДНЫХ РЕСУРСОВ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Департамент особо охраняемых природных территорий, объектов и сохранения биоразнообразия Государственный природный биосферный заповедник Катунский УДК 502.72 (091), (470.21) Утверждаю _ Регистрац. № Дирек тор заповедника Инвентарный № _2004г. Летопись природы Книга 6 2003 год Рис. 6 Табл. 47 С. 225 Усть-Кокса 2004 Содержание ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………. 1. ТЕРРИТОРИЯ ЗАПОВЕДНИКА……………………………………….…. 2. ПРОБНЫЕ ПЛОЩАДИ И ПОСТОЯННЫЕ ...»

«ИГОРЬ ЮРЬЕВИЧ СТЕНИН НАДЕЖДА ПАВЛОВНА СТЕНИНА РАЗВЕДЕНИЕ ГРИБОВ НА ДАЧНОМ УЧАСТКЕ, В КВАРТИРЕ, В ГАРАЖЕ Москва - Санкт-Петербург центрполиграф МиМ-Дельта 2002 ББК 42.349 С79 Охраняется Законом РФ об авторском праве. Воспроизведение всей книги или любой ее части воспрещается без письменного разрешения издателя. Любые попытки нарушения закона будут преследоваться в судебном порядке. Оформление художника И.А. Озерова Стенин И.Ю., Стенина Н.П. Разведение грибов на дачном участке, в квартире, в ...»






 
© 2013 www.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.