WWW.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 

Pages:   || 2 |

«В.А. Громова, Ю.В. Захарова РУКОВОДСТВО ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ СТУДЕНТОВ ПО САНИТАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ ВОДЫ, ПОЧВЫ, ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ОРГАНИЗАЦИЙ Кемерово – ...»

-- [ Страница 1 ] --

Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального

образования Кемеровская государственная медицинская академия

В.А. Громова, Ю.В. Захарова

РУКОВОДСТВО ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

СТУДЕНТОВ ПО САНИТАРНОЙ МИКРОБИОЛОГИИ ВОДЫ,

ПОЧВЫ, ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ОРГАНИЗАЦИЙ

Кемерово – 2010

1

УДК 579 (075.4)

Громова В. А., Захарова Ю. В. Руководство для самостоятельной работы студентов

по санитарной микробиологии воды, почвы, лечебно-профилактических

организаций. - Кемерово, 2010.-90 с.

Учебное пособие по санитарной микробиологии дополняет основные

учебники по микробиологии, вирусологии и иммунологии подробными

современными сведениями по санитарно-микробиологическому исследованию воды, почвы, воздуха, а также сведениями по контролю санитарного режима лечебно-профилактических организаций.

Учебное пособие предназначено для самостоятельной работы студентов медицинских вузов специальностей: 060104.65 «медико-профилактическое дело», 060101.65 «лечебное дело», 060103.65 «педиатрия».

Рецензенты:

Громов К. Г.-д-р мед. наук, проф., зав. кафедрой общей гигиены ГОУ ВПО КемГМА Росздрава.

Красноженов Е. П.-д-р мед. наук, проф., зав. кафедрой микробиологии и вирусологии Сибирского государственного медицинского университета.

© Кемеровская государственная медицинская академия.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Раздел 1. Введение в санитарную микробиологию

1.1. Критерии санитарной микробиологии

1.2. Требования к СПМ

1.3. Методы санитарной микробиологии

Раздел 2. Санитарная микробиология воды

2.1. Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды централизованного водоснабжения

2.1.1 Отбор проб воды

2.1.2 Определение общего числа микроорганизмов

2.1.3. Определение ОКБ и ТКБ методом мембранной фильтрации

2.1.4. Определение ОКБ и ТКБ титрационным методом

2.1.5. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий

2.1.6. Определение колифагов

2.1.7. Проведение количественного анализа колифагов

2.1.8. Анализ результатов санитарно-микробиологического исследования питьевой водопроводной воды

2.2. Вода питьевая расфасованная в емкости

2.2.1. Определение P. aeruginosa

2.3. Вода нецентрализованного водоснабжения

2.4. Санитарная микробиология поверхностных водных объектов

2.4.1. Правила забора проб воды из поверхностных водных объектов................ 2.4.2. Подготовка проб воды к анализу

2.4.3. Определение ОМЧ

2.4.4. Определение ОКБ и ТКБ

2.4.5. Определение колифагов

2.4.6. Определение бактерий рода Salmonella

Раздел 3. Санитарная микробиология почвы

3.1. Отбор и подготовка проб почвы

3.2. Определение ОМЧ почвы

3.3. Определение числа термофилов в почве

3.4. Определение титра нитрифицирующих бактерий

3.5. Определение титра аммонификаторов

3.6. Определение коли-титра почвы

3.6.2. Метод мембранной фильтрации

3.6.3. Метод прямого посева

3.7. Определение количества энтерококков в почве

3.8. Определение титра C. perfringens

3.9. Определение сальмонелл в почве

3.10. Анализ результатов исследования почвы

Раздел 4. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха................. 4.1. Особенности и методы отбора проб воздуха

4.2. Определение ОМЧ воздуха больничной палаты аспирационным методом

4.3. Определение ОМЧ воздуха бактериологического бокса седиментационным методом

4.4. Определение количества S. aureus в воздухе помещений класса чистоты А (операционные, родильные залы) аспирационным методом

4.5. Анализ результатов санитарно-микробиологического исследования воздуха помещений

Раздел 5. Санитарно-микробиологическое исследование ЛПО

5.1. Контроль стерилизации ………………

5.1.1 Объекты контроля стерильности и объем исследований

5.1.2 Подготовка бокса, инструментов, питательных сред и персонала к работе

5.1.3 Исследование на стерильность хирургических инструментов

5.1.4 Особенности исследования на стерильность лигатурного шовного и перевязочного материала

5.1.5 Бактериологический контроль работы паровых и воздушных стерилизаторов

5.2 Контроль качества дезинфекции изделий медицинского назначения.....……………………………………………………… 5.3 Контроль обработки рук медицинского персонала

Раздел 6.Питательные среды, применяемые в санитарной микробиологии …

Нормативные документы по санитарной микробиологии

Тестовые задания для самоподготовки

Эталоны ответов на тестовые задания

Ситуационные задачи

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Список рекомендуемой литературы

БГКП -бактерии группы кишечной палочки БОЕ - бляшкообразующие единицы ВБИ -внутрибольничные инфекции ГОСТ - государственный стандарт ЖСА - желточно-солевой агар КМАиФАМ - количество мезофильных аэробных и факультативноанаэробных микроорганизмов КОЕ - колониеобразующие единицы ЛПС - лактозо-пептонная среда ЛПО - лечебно-профилактические организации МПА - мясо-пептонный агар МУК - методические указания НВЧ - наиболее вероятное число микроорганизмов ОКФБ (ОКБ) - общие колиформные бактерии ОМЧ - общее микробное число СанПиН - санитарные правила и нормы СПМ - санитарно-показательные микроорганизмы ТГС - тиогликолевая среда ТКФБ (ТКБ) - термотолерантные колиформные бактерии На рубеже XX-XXI веков назрела необходимость пересмотра нормативных и методических документов, регламентирующих качество питьевой воды, воды водоемов-источников водоснабжения, пищевых продуктов, почвы, а также документов по качеству стерилизации и дезинфекции в лечебно-профилактических организациях. Это связано с новыми научными знаниями и необходимостью согласования Российских нормативов с рекомендациями ВОЗ.

В начале XXI века в Российской Федерации разработан и введен в действие ряд СанПиНов и методических указаний, касающихся контроля качества и безопасности питьевой воды, пищевых продуктов, почвы и методов их исследования, пересмотрены документы по контролю санитарного режима ЛПО и аптек.

Однако, это не нашло отражения в основных учебниках микробиологии. Поэтому мы сочли необходимым составить на основе новых нормативно-методических документов пособие по санитарной микробиологии для студентов медицинских высших учебных заведений. Полагаем, что оно послужит формированию современных представлений в области санитарной микробиологии, поможет в выполнении самостоятельной работы на занятиях и в дальнейшем станет основой для успешного изучения гигиенических дисциплин.

Раздел 1. Введение в санитарную микробиологию Санитарная микробиология – раздел экологической микробиологии, который изучает контаминацию внешней среды условно-патогенными и патогенными микроорганизмами и возможность их передачи человеку.

Через воду, почву и пищевые продукты распространяются возбудители кишечных, некоторых зоонозных и сапронозных инфекций.

Через воздух реализуются воздушно-капельные и воздушно-пылевые пути передачи таких инфекций, как грипп, ОРЗ, корь, дифтерия, туберкулез, коклюш и др.

Санитарная микробиология стоит на службе эпидемиологии и гигиены, предупреждая опасность возникновения массовых вспышек инфекционных заболеваний.

Перед санитарной микробиологией ставятся следующие задачи:

1. Разработка нормативов (СанПиНов) для объектов внешней 2. Разработка и совершенствование микробиологических методов исследования объектов внешней среды;

3. Эпидемиологическая оценка объектов внешней среды по микробиологическим показателям;

4. Разработка мер по защите биосферы от контаминации (загрязнения) патогенными и условно-патогенными микроорганизмами;

5. Осуществление контроля за выполнением требований нормативных документов.

Для получения полноценной и достоверной информации о санитарном состоянии объекта необходимо руководствоваться следующими принципами:

• Осуществлять правильный забор проб (в соответствии с • Соблюдать принцип повторности исследования объекта;

• Производить серийный забор проб (из разных мест, по • Использовать комплекс тестов;

• Применять только стандартные, унифицированные • Оценивать объект по совокупности полученных данных.

Для санитарно-эпидемиологической оценки объекта используют следующие критерии (тесты):

1.1 Критерии санитарной микробиологии 1. Общее микробное число (ОМЧ) – число всех микроорганизмов, присутствующих в 1,0 г, 1,0 мл субстрата или в 1 м3 воздуха.

Для определения ОМЧ используются методы прямого счета микроорганизмов под микроскопом.

КМАиФАМ – количество мезофильных аэробных и факультативноанаэробных микроорганизмов – число бактерий, способных образовывать колонии на поверхности и/или в пиательном агаре при температуре 20-37оС в течение 24-48 часов, видимые с увеличением в 2 раза.

Критерий используется для суждения об органическом загрязнении объекта, при этом исходят из предположения, что чем больше в объекте органических соединений, тем больше микроорганизмов, в том числе патогенных.

ОМЧ определяют для оценки качества воды, воздуха, почвы, некоторых пищевых продуктов, поверхностей оборудования и инвентаря больниц, аптек и других помещений.

2. Группа санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ) – служит косвенным показателем санитарного неблагополучия и потенциальной эпидемической опасности объекта.

СПМ – это индикаторы биологического загрязнения объекта выделениями человека и животных, опасного в отношении распространения инфекционных заболеваний.

СПМ делят на 3 группы:

1 гр (А) – обитатели кишечника, показатели фекального загрязнения (микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae, энтерококки, клостридии и др.) 2 гр (В) – обитатели верхних дыхательных путей, индикаторы орального загрязнения объекта (патогенные стафилококки, гемолитические стрептококки);

3 гр (С) – сапрофиты, автохтонные представители внешней среды, индикаторы процессов самоочищения почвы, воды водоемов (аммонификаторы, нитрифицирующие бактерии и др.) Не каждый микроб может быть избран в качестве санитарнопоказательного, СПМ должны соответствовать определенным требованиям.





1.2 Требования к санитарно-показательным микроорганизмам 1. Должны постоянно содержаться в выделениях человека и поступать в окружающую среду в больших количествах;

2. Не должны иметь другого природного резервуара кроме человека и животных;

3. Должны сохранять свою жизнеспособность во внешней среде в течение сроков, близких к выживанию патогенных м/о, на присутствие которых они указывают;

4. Не должны размножаться во внешней среде;

5. Должны иметь устойчивый генотип и не изменяться быстро под влиянием факторов внешней среды;

современными методами.

Ни один микроорганизм идеально не удовлетворяет всем требованиям. Но, поскольку основная масса микроорганизмов выделяется во внешнюю среду с фекалиями и орально-капельными механизмами, то обнаружение представителей микрофлоры кишечника и полости рта и носа говорит о соответствующем загрязнении объекта. Наиболее оптимальными индикаторами фекального загрязнения объекта (1 группа СПМ) являются бактерии семейства Enterobacteriaceae, родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia. Эта группа микроорганизмов признается бактериологами всего мира как показатель фекального загрязнения воды, почвы, пищевых продуктов и поверхностей.

В отечественной специальной литературе эта группа обозначается как БГКП – бактерии группы кишечной палочки, международное название этой группы ОКФБ или ОКБ – общие колиформные бактерии.

ОКБ – это грамотрицательные палочки, не образующие спор, размножающиеся в присутствии желчных кислот, не имеющие оксидазы и ферментирующие глюкозу и лактозу до кислоты и газа при температуре 37±1оС в течение 24-48 часов.

Из группы ОКБ выделяют термотолерантные колиформные бактерии (ТТКФБ или ТКБ), которые обладают всеми признаками ОКБ и, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при температуре 44± 0,5оС в течение 24 ч.

Наиболее полно отражает фекальное загрязнение опасное в отношении распространения кишечных инфекций сама кишечная палочка (E.coli). это «рабочая лошадка» санитарной микробиологии содержится в фекалиях в концентрации 106 - 108 в 1 г.

E.coli - это грамотрицательная, не образующая спор палочка, ферментирующая лактозу при t 44± 0,5оС, не имеющая оксидазы, образующая индол.

ТКБ и E.coli являются показателем свежего фекального загрязнения объекта.

В практической санитарной микробиологии полная идентификация E.coli отнимает много времени и средств, поэтому часто ограничиваются определением ОКБ и ТКБ.

Дополнительным показателем фекального загрязнения объекта и показателем эффективности дезинфекции воды являются энтерококки.

Энтерококки-грамположительные кокки, образующие короткие цепочки, постоянно находятся в кишечнике человека и выделяются в большом количестве (105 – 107 в 1 г фекалий). Это E. faecalis, E. faecium, E. salivarius, E.durans. Отличаются высокой устойчивостью к хлору, желчи, повышенной концентрации соли (Na Cl), температуре до 60о, широкому диапозону рН, поэтому являются показателем качества обеззараживания (дезинфекции, пастеризации) объекта.

грамположительные палочки, редуцирующие сульфит натрия при температуре 44± 1,0оС в течение 18 часов на железо-сульфитном агаре.

Клостридии (C. perfringens, C. sporogenes) обычно присутствуют в фекалиях в меньших концентрациях, чем E.coli – 103 в 1 г, но образуют споры, поэтому способны значительно дольше сохраняться во внешней среде и более устойчивы к обеззараживанию. Являются показателем давнего фекального загрязнения объекта и недостаточной эффективности обеззараживания таких объектов как вода, почва, пищевые продукты, лечебные грязи.

(грамположительные кокки, бациллы, актиномицеты, спириллы), способных размножаться при температуре 55-60оС.

Показатель загрязнения почвы, воды водоемов компостами и навозом.

Коли-фаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli при температуре 37±1оС и формировать зоны лизиса бактериального газона (бляшки) через 18±2 часа на питательном агаре. Из-за сходства с кишечными вирусами человека предложены как индикаторы фекального вирусного загрязнения воды, почвы, пищевых продуктов. Они более устойчивы к обеззараживанию (хлору), чем ОКБ и поэтому отсутствие ОКБ еще не говорит об отсутствии в воде кишечных вирусов. В фекалиях содержатся в небольших количествах, но быстро размножаются в сточных водах и являются показателем загрязнения фекально-хозяйственными стоками.

2 группа (В) СПМ – индикаторы орально-капельного загрязнения объектов внешней среды.

Золотистый стафилококк – грамположительные кокки, образующие золотисто-желтые колонии на желточно-солевом агаре, обладающие лецитиназой и плазмокоагулазой. Носителями S. aureus являются около 50% людей. Стафилококк устойчив во внешней среде. Определение S.

аureus рекомендуется при оценке воздуха лечебно-профилактических учреждений, аптек, жилых помещений, воды плавательных бассейнов, детских молочных смесей.

-гемолитические стрептококки – могут служить показателем эпидемического неблагополучия воздушной среды, т.к. выделяются от 50 – 70% людей и малоустойчивы во внешней среде.

Грибы рода Candida и споры плесневых грибов рекомендуется рассматривать как санитарно-показательные микроорганизмы, выделяющиеся из организма человека и животных с фекалиями, из дыхательных путей, с кожи. Устойчивы во внешней среде. Используются как показатели санитарного состояния воздуха аптек и ЛПО.

К 3 группе СПМ относятся индикаторы процессов самоочищения почвы, воды водоёмов. Это микроорганизмы представители автохтонной микрофлоры почвы и воды водоемов:

1. Аммонификаторы 2. Нитрифицирующие бактерии.

3. Актинобактрии 4. Целлюлозоразрушающие бактерии.

Аммонификаторы – группа микроорганизмов, разлагающих белки и мочевину до аммиака и его солей. К ним относятся гнилостные аэробные и анаэробные микроорганизмы: Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Serratia marcescens, м/о рода Proteus, грибы родов Mucor, Aspergillus, Clostridium sporogenes, Clostridium putrificum, уробактерии. Являются показателями массивного органического загрязнения и процессов гниения.

Нитрифицирующие бактерии родов Nitrosomonas и Nitrobacter, обладающие способностью окислять аммиак до нитритов и нитратов.

Грамотрицательные бактерии, открытые С.Н. Виноградским в 1899г.

Являются показателями органических загрязнений и активных процессов самоочищения объектов.

Актинобактерии – группа грамположительных, ветвящихся микроорганизмов, активных участников превращений органических соединений, содержащих углерод.

Целлюлозоразрушающие микроорганизмы – почвенные бактерии и грибы, утилизирующие целлюлозу как источник углерода.

По эпидемическим показаниям в объекте также могут определяться патогенные бактерии.

Сальмонеллы – грамотрицательные палочки семейства энтеробактерий, возбудители острых кишечных инфекций. Широко распространены среди животных, птиц, грызунов, встречаются носители среди людей. Могут размножаться в воде водоемов, почве, пищевых продуктах. Прямые показатели эпидемической опасности объекта.

Bacillus anthracis - возбудитель сибирской язвы, споры B. anthracis десятилетиями сохраняются в почве.

Вирусы : энтеровирусы, ротавирусы человека, выделяющиеся с фекалиями, могут длительное время сохранятся в воде водоемов и почве, также свидетельствуют о прямой эпидемической опасности объекта.

Содержание СПМ выражают в титрах, индексах и НВЧ.

Титр – минимальное количество субстрата (в мл, см3, граммах), в котором ещё обнаруживаются СПМ.

Например: коли-титр воды – 300 мл;

перфрингенс титр почвы – 0,1 грамма.

Индекс – количество СПМ, содержащееся в единице объема какого-либо субстрата.

Например: коли-индекс воды – 3 ОКБ в 1 литре;

НВЧ – наиболее вероятное число – количество СПМ в единице объема субстрата (1л, 1 см3, 1г) – показатель, который может колебаться в пределах доверительных границ с вероятностью 95%.

1.3 Методы санитарной микробиологии Санитарная микробиология использует прямой и косвенный методы для оценки санитарно-эпидемиологического состояния объектов внешней среды.

Прямой метод предполагает непосредственное выделение патогенных микроорганизмов из окружающей среды. Делается это по эпидпоказаниям, при возникновении угрозы распространения конкретной инфекции (например, сибирской язвы, сальмонеллеза, гепатита А и др.). Метод надежный, хотя и трудоёмкий. Позволяет выявить возбудителя одного вида и не свидетельствует об отсутствии других.

Более полно оценить санитарно-эпидемиологическое состояние объекта позволяет косвенный метод.

Косвенный метод предполагает определение критериев санитарной микробиологии, ОМЧ и КМАиФАМ, а также индексов и титров санитарнопоказательных микроорганизмов.

Методы определения критериев санитарной микробиологии в разных объектах внешней среды унифицированы и регламентированы официальными ГОСТами, методическими указаниями, СанПиНами Минздрава РФ, что положено в основу методического руководства.

В разработке методов и СанПиНов участвовали ведущие гигиенические центры, НИИ и университеты страны:

-НИИ экологии человека и окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН;

-Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Минздрава РФ;

-Российский государственный медицинский университет и др.

Раздел 2. Санитарная микробиология воды Вода – главный природный ресурс, без которого невозможна жизнь на Земле. Постепенно человечество пришло к тому, что воду из поверхностных водных объектов из-за антропогенных воздействий невозможно использовать для питьевых целей без специальной обработки.

Возникли проблемы с обеспечением населения доброкачественной питьевой водой. В нашей стране и в Кузбассе, в частности, принята целевая программа «Чистая вода», включающая:

- организацию зон санитарной охраны источников водоснабжения;

- строительство и реконструкцию водопроводных сооружений;

- замену изношенных водопроводов;

-сооружение предприятий по очистке сточных хозяйственно-бытовых, ливневых, производственных вод;

-строительство предприятий по производству бутилированной воды;

-перевод на подземные источники и др.

Все перечисленные меры направлены на улучшение качества воды, потребляемой населением, на ее эпидемическую безопасность. Так как через воду могут передаваться различные инфекционные заболевания, такие как дизентерия, брюшной тиф, холера, лептоспироз, туляремия, легионеллез, вирусные гепатиты А и Е, полиомиелит и др.

В зависимости от назначения вода классифицируется на:

-питьевую воду централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения;

-питьевую воду, расфасованную в ёмкости;

-воду источников водоснабжения (рек, озер);

-питьевую воду колодцев, родников, скважин;

-воду плавательных бассейнов;

-хозяйственно-бытовые сточные воды после очистки и обеззараживания.

Для всех видов воды существует множество показателей, из которых мы выделяем микробиологические критерии.

2.1 Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды централизованного водоснабжения Санитарно-микробиологическое исследование питьевой воды централизованного водоснабжения согласно СанПиН 2.1.4.1074- «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества.»

включает определение ОМЧ (КМАиФАМ), ОКБ и ТКБ, спор сульфитредуцирующих бактерий, коли-фагов и цист лямблий (таблица №1) Нормативы по микробиологическим и паразитологическим показателям для воды питьевой водопроводной (СанПиН 2.1.4.1074-01).

(КМАиФАМ) сульфитредуцирующих клостридий Примечание: при определении проводится трехкратное исследование по 100 мл отобранной пробы воды.

Определение колифагов и цист лямблий проводится перед подачей воды в распределительную сеть.

Определение спор клостридий проводится при оценке эффективности обработки воды.

По эпидпоказаниям определяют патогенные микроорганизмы.

1. Для микробиологического анализа пробы воды отбирают по «ГОСТ Р 51593-2000. Вода питьевая. Отбор проб».

Для отбора проб воды используют стерильную одноразовую посуду или ёмкости многократного применения (не менее 300 см3), стерилизованные сухим жаром или автоклавированием. Для нейтрализации дезинфектанта в ёмкость до стерилизации вносят серноватистокислый натрий из расчёта мг на 500 см3 воды. Кран обжигают, полностью открывают и спускают воду в течении 10 мин, для слива застоявшейся воды. При отборе проб воды напор можно уменьшить. Пробы забирают с соблюдением стерильности.

После отбора пробы, емкость сразу закрывают стерильными крышками и колпачками. Маркируют, сопровождают актом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора и фамилии, имени, отчества специалиста. Микробиологический анализ воды должен быть произведен в течение 2-х часов после отбора. При невозможности соблюдения сроков исследования, пробы воды допускается хранить в течение 6 часов в контейнерах –холодильниках при температуре +4-10оС.

Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды проводится согласно методическим указаниям МУК 4.2.1018-01 «Санитарномикробиологический анализ питьевой воды», Минздрав РФ, М. 2001.

2.1.2 Определение общего числа микроорганизмов ОМЧ – общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов в 1 мл воды, способных образовывать колонии в/на питательном агаре при температуре 37оС в течение 24 часов, видимые при увеличении в 2 раза. ОМЧ воды обозначают и как КМАиФАМ.

Из каждой пробы воды делают посев по 1 мл в две стерильные чашки Петри, заливают 8-12 мл расплавленного и остуженного до 45о питательного агара, быстро смешивают, распределяя по всему дну до застывания агара. Чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при t 37оС в течение 24±2 ч (схема № 1 ).

Учитывают все выросшие колонии, наблюдаемые при увеличении в 2 раза.

Количество колоний суммируют, делят на 2. Результат выражают в КОЕ в мл исследуемой воды.

Если на одной из чашек подсчет невозможен (сплошной рост или колоний) выдают результат по одной чашке.

Согласно СанПиНу 2.1.4-1074-01 ОМЧ не должно превышать 50 КОЕ в мл воды.

Исследование общего микробного числа в питьевой воде 1.ОТБОР ПРОБЫ ВОДЫ 2.ПОСЕВ ПРОБЫ ВОДЫ -по 1,0 мл исследуемой воды пипеткой внести в 2 чашки Петри -залить 8-12 мл расплавленного МПА (t 45°С) -быстро смешать распределяя по дну чашки 3.КУЛЬТИВИРОВАНИЕ -после застывания поместить в термостат при t 37°С на 24 часа 4.УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ 2.1.3 Определение ОКБ и ТКБ методом мембранной фильтрации Метод основан на фильтрации определенного объема воды (300мл) через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциальнодиагностической среде с лактозой (Эндо) и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим признакам.

Мембранные фильтры подготовленные к анализу (кипячёные или стерилизованные другим способом), помещают стерильным пинцетом в воронку фильтровального аппарата. В воронку прибора наливают отмеренный объем воды и создают вакуум. После фильтрования фильтр снимают и, не переворачивая, кладут на поверхность питательной среды Эндо. На одну чашку можно поместить 3 фильтра. При исследовании питьевой воды фильтруют 3 объема по 100 мл. при анализе воды неизвестного качества целесообразно фильтровать другие объемы воды для получения изолированных колоний на фильтре (10,40, 100 и 150 мл).

Чашки с фильтрами инкубируют вверх дном в термостате при t 37оС в течение 24 часов.

Если на фильтрах нет роста или выросли нетипичные плёнчатые, плесневые, расплывчатые колонии, выдают отрицательный результат. ОКБ и ТКБ в 100 мл исследованной воды отсутствуют.

При росте на фильтрах типичных изолированных лактозоположительных (темно-красных с отпечатками на обратной стороне фильтра) колоний, подсчитывают их число и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.

-проводят микроскопию мазков из 3-4 колоний, окрашенных по Граму (учитывают грамотрицательные);

-определяют наличие оксидазы (учитывают оксидазоотрицательные, т.к.

оксидазоположительные грамотрицательные палочки не относятся к энтеробактериям, а могут быть, например, псевдомонадами);

-определяют ферментацию лактозы до кислоты и газа при температуре 37оС, что важно для слабоокрашенных колоний и отношения их к ОКБ, и температуре 44± 0,5оС, чтобы решить вопрос об их принадлежности к ТКБ.

На бумагу, смоченную 1% спиртовым раствором -нафтола и 1% водным раствором диметилфенилендиамина, наносят платиновой петлей или стеклянной палочкой часть окрашенной колонии. реакцию считают положительной, если в течение 1 минуты, максимум 4-х появляется синее или фиолетовое окрашивание. Оксидазоположительные колонии не учитывают и дальнейшему исследованию не подвергают.

Можно переносить фильтр с колониями на бумагу смоченную реактивом.

Можно использовать готовые бумажные системы (СИБы), смоченные дистиллированной водой.

На способность ферментировать лактозу испытывают части колоний грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий. При этом используется полужидкая среда с лактозой и индикатором рН. Посев производится уколом до дна в 2 пробирки. Одна инкубируется при температуре 37±1оС 24-48 часов для подтверждения отношения к ОКБ, другая при температуре 44± 0,5оС 24 часа, возможен учет через 4-6 часов, для подтверждения наличия ТКБ.

При наложении колоний на фильтре, производится их рассев, затем полученные изолированные колонии идентифицируются. Колонии учитывают как ОКБ – если они красные на Эндо, содержат грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, разлагающие лактозу при температуре 37 оС до кислоты и газа. Колонии учитывают как ТКБ, если они содержат грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, ферментирующие лактозу при температуре 44 оС до кислоты и газа (схема № 2 ).

Определение ОКБ и ТКБ методом мембранной фильтрации 1.Профильтровать 300 мл исследуемой воды:

к насосу 2. поместить фильтры на среду Эндо 3. инкубировать при t 37°С на 24 часа 4. учесть характер колоний на Эндо; красные (lac+) и розовые (lac-) 5. микроскопировать, окрасить по Граму (грамположительные не учитывать) 6. поставить оксидазный тест с колониями грамотрицательных палочек бумага смоченная реактивом -нафтол+ диметил-фенилендиамин 7. розовые и красные колонии пересеять на ЛПС, инкубировать при t 37°С, при наличии КГ-учесть как ОКБ темно-красные колониии отсеять на ЛПС, инкубировать при t 44,5°С, при наличии КГ, учесть как ТКБ 7. результат анализа выразить числом КОЕ ОКБ/ТКБ в 300 мл воды.

Число ОКБ и ТКБ подсчитывают на всех фильтрах и выражают результат анализа в КОЕ ОКБ/ТКБ на 100 мл воды.

Вычисление проводят по следующей формуле: х = (а·100):V, где х – число колоний в 100 мл ;

V – объем воды, профильтрованный через фильтры (300 мл);

а – число подсчитанных колоний на всех фильтрах.

2.1.4 Определение общих и термотолерантных колиформных Титрационный метод может быть использован:

-при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для метода мембранной фильтрации;

-при наличии в воде большого количества взвешенных веществ и преобладания посторонней микрофлоры.

Принцип метода: метод основан на посеве нормируемого объема воды на жидкую среду с лактозой с последующим пересевом на дифференциальную среду Эндо и идентификации колоний по культуральным и биохимическим тестам (схема 3).

Определение ОКБ и ТКБ титрационным методом При качественном исследовании воды засевают 3 объема по 100 мл.

Для количественного определения ОКБ и ТКБ производят посев: 3-х объемов по 100 мл, 3-х объемов по 10 мл и 3-х объемов по 1 мл.

Посевы производят в жидкую лактозо-пептонную среду двойной концентрации, для объема 100мл — 10мл среды, для объема 10 мл — 1 мл среды; для объема 1 мл — 10 мл среды обычной концентрации.

Инкубируют при t 37оС — 24-48 часов.

Через 24 часа при обнаружении помутнения и газообразования производят пересев петлей на сектора среды Эндо для получения изолированных колоний. Ёмкости без наличия роста оставляют ещё на 24 часа.

При наличии типичных темно-красных колоний дают положительный ответ на наличие ОКБ. Отношение выделенных колоний к ОКБ требуется подтверждать в том случае, если в среде накопления отмечено только помутнение, если колонии на среде Эндо слабо окрашены (розовые) Для подтверждения проводят:

-оксидазный тест;

-окраску мазка по Граму;

-пересев на среду с лактозой при t 37оС с инкубацией в течение часов.

Оксидазаотрицательные грамотрицательные бактерии, дающие кислоту и газ (КГ) на среде с лактозой при t 37 оС учитывают как ОКБ.

Для определения термотолерантных колиформных бактерий из типичных темнокрасных колоний на среде Эндо делают пересев на прогретую при температуре 44 оС среду с лактозой и инкубируют при при t 44± 0,5 оС часа. При обнаружении кислоты и газа (КГ) учитывают как ТКБ.

Учет результатов:

При отрицательном ответе (отсутствие роста на средах) выдают заключение:ОКБ/ТКБ не обнаружены в 300 мл.

При качественном исследовании пишут: обнаружено в 300 мл.

При количественном методе определяют НВЧ ОКБ и ТКБ по таблице (приложение – таблица № 1.1 из МУК-4.2.1018 -01).

Расчет наиболее вероятного числа бактерий в 100 мл питьевой воды Принцип метода:

Основан на выращивании посевов воды в железо-сульфитном агаре в условиях, приближенных к анаэробным, и подсчета числа черных колоний.

1. Пробу воды 2. Пробирки с железосульфитным агаром расплавить на водяной бане при t 70-80оС.

3. Профильтровать 20 мл воды через мембранный фильтр.

4. Пинцетом поместить фильтр в пробирку с горячим железо-сульфитным агаром. Охладить.

5. Культивировать при 44± 1оС 16-18 часов.

Примечание: фильтры можно помещать в чашки Петри с железосульфитным агаром фильтрующей поверхностью вниз и залить расплавленным железосульфитным агаром до верхнего края чашки.

Учет результатов:

Подсчитывать черные колонии, выросшие на фильтрах и в толще среды:

Результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) спор клостридий в 20 мл среды. При отсутствии роста дают ответ: не обнаружено в 20 мл воды.

Колифаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при t 37±1оС через 18±2 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питательном агаре.

Используется: тест-культура E.coli K 12F+ StrR.

Применяется титрационный метод качественного и количественного анализа. По эпидемическим показаниям наряду с титрационным методом используется прямой метод определения колифагов.

Принцип прямого метода:

Определение колифагов в питьевой воде путем прямого посева нормируемого объема воды (100мл) и последующего учета зон лизиса (бляшек) на газоне E.coli в чашках Петри с питательным агаром.

Проведение анализа:

1. В расплавленный и остуженный питательный агар (100мл) двойной концентрации добавить 2 мл взвеси тест-культуры E.coli (109 в 1 мл), перемешать.

2. Исследуемую воду (100мл) нагреть до 35-44 оС и разлить в 5 чашек.

Петри по 20 мл.

3. Сразу же внести в каждую чашку по 20 мл смеси агара с культурой E.coli. Перемешать. Для контроля E.coli на лизогенность в одну чашку внести 20 мл стерильной водопроводной воды.

4. Инкубировать при t 37оС 18±2 часа.

5. Учесть результаты ( схема № 4 ) Для проведения текущего контроля качества питьевой воды по вирусологическому показателю применяется титрационный метод определения колифагов.

Принцип метода заключается в предварительном накоплении колифагов в среде с культурой E. coli и последующем выявлении зон лизиса на газоне E. coli.

Тест-культуру E. coli K 12F+ StrR накапливают на скошенном МПА со стрептомицином 18±2 часа при t 37 оС, смывают стерильным физиологическим раствором и по стандарту мутности готовят взвесь в концентрации 109 в 1 мл.

Определение колифагов в питьевой воде прямым методом питательный агар двойной концентрации 100 мл t 44оС II.

III. Внести по 20 мл. смеси агара с E. coli, перемешать, остудить IV. Инкубировать при t 37 о С 18±2 часа V. Учет результатов по БОЕ на газоне E. coli.

Учет результатов проводят путем подсчета и суммирования бляшек, образовавшихся на пяти чашках Петри.

Результат выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ) на 100 мл воды ( например:

2 БОЕ в 100 мл. воды).

В контрольной чашке бляшки должны отсутствовать.

2.1.7 Проведение количественного анализа Исследуемую пробу воды в количестве 100 мл разливают на 6 объемов, флакон 50 мл и 5 пробирок по 10 мл., добавляют концентрированный питательный бульон в соотношении 10:1 и 0,5 мл во флакон и по 0,1 мл в пробирки взвеси E. coli 109.

Для контроля культуры E. coli 0,1 мл помещают в чашку Петри и заливают питательным агаром. В этой чашке зон лизиса не должно быть.

Все посевы инкубируют при t 37±1 оС в течение 18±2 часов.

Предполагается, что в течение этого времени произойдет размножение колифагов, присутствующих в воде. После инкубации из объема 50 мл отливают в пробирку 10 мл. Во все 6 пробирок добавляют по 1 мл хлороформа, закрывают и энергично встряхивают, затем оставляют на минут для осаждения хлороформа. Затем на чашку с питательным агаром и взвесью тест-культуры E. coli производят высевы продольным штрихом на 6 секторов из каждой пробы. Ставят в термостат при t 37±1 оС в течение 18±2 часов.

Учёт производят по наличию зон лизиса на секторах газона E.coli ( схема № 5 ).

Оценка производится по таблице наиболее вероятного числа (НВЧ) бляшкообразующих единиц (БОЕ) (таблица 1.2. с. 34 МУК) В протоколе указывают НВЧ колифагов в 100 мл воды.

Схема определения БОЕ фагов в воде количественным методом Проба воды Концентрированный питательный Взвесь Инкубация при 37± 1оС 18 ± 2 часа - накопление колифагов Встряхиваем и инкубируем 15 минут для осаждения хлороформа Результат: количественный подсчет соответствует (по таблице) НВЧ 2, колифагов в 100 мл воды.

Наиболее вероятное число (НВЧ) колифагов в 100 мл Число положительных результатов НВЧ в Вероят Нижний Верхний Из 1 объема по 2.1.8 Анализ результатов санитарно-микробиологического исследования питьевой водопроводной воды Общая микробная обсемененность - чувствительный показатель увеличения в воде легкоусвояемых органических веществ и характеризует, как правило, санитарное состояние разводящих водопроводных сетей и их герметичность.

Наличие в воде бактерий-индикаторов фекального загрязнения ОКБ, ТКБ и E. сoli говорит о возможном присутствии патогенных бактерий возбудителей кишечных инфекций. Общие колиформные бактерии не всегда напрямую связаны с наличием фекального загрязнения, такие бактерии как Serratia, Citrobacter могут обитать в воде водоемов. Однако этот тест всё же применим для микробиологического контроля качества воды, т.к. коррелирует с содержанием E. сoli. ТКБ, способные ферментировать лактозу при t 44±0,5 оС, подтверждают свежий фекальный характер загрязнений. Споры сульфитредуцирующих клостридий живут в воде дольше и более устойчивы к обеззараживанию, чем колиформные бактерии и поэтому их присутствие в воде, прошедшей дезинфекцию, говорит о недостаточной очистке и возможном наличии устойчивых патогенных микроорганизмов.

Колифаги важны как индикаторы загрязнения питьевой воды сточными водами и опасности в отношении кишечных вирусных инфекций. Цисты лямблий – показатель опасности воды по протозойным заболеваниям.

2.2 Вода питьевая расфасованная в ёмкости На основании Федерального закона «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» от 30.03.99.г. и в целях обеспечения населения качественной питьевой водой, в 2002 году введен в действие СанПиН 2.1.4.1116-02 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды расфасованной в ёмкости. Контроль качества».

Этот документ предназначен для предприятий, реализующих расфасованную питьевую воду, а также для органов санитарноэпидемиологической службы.

В документе наряду с санитарно-химическими показателями, нормами радиационной безопасности и физиологической полноценности по макрои микроэлементам нормируются микробиологические и паразитологические показатели, которые представлены в таблице № 4.

Нормативы по микробиологическим и паразитологическим показателям для воды питьевой расфасованной в емкости СанПиН 2.1.4.1116- бактерии колиформные бактерии колиформные бактерии сульфитредуцирующих клостридий криптоспоридий В отличие от питьевой воды централизованного водоснабжения, в воде расфасованной в ёмкости предусмотрено определение ОМЧ (КМАиФАМ) не только при t 37оС, но и при 22 оС, что более полно отражает санитарноэпидемиологическое состояние источника воды. Кроме того, среди показателей фекального загрязнения есть тест более широкого диапазона, чем ОКБ и ТКБ – глюкозо-положительные бактерии, который обеспечивает более надежную безопасность воды в отношении кишечных инфекций.

Введён норматив по содержанию в расфасованной воде синегнойной палочки (Pseudomonas auruginosa). Микроорганизмы рода Pseudomonas – сапробы, могут размножаться в воде источников водоснабжения и, являясь условно-патогенными, способны вызвать инфекционные процессы у ослабленных людей, детей и стариков. Колифаги как вирусологический показатель нормируется в 1000 мл. Из паразитологических показателей определяются не только цисты лямблий, но и ооцисты криптоспоридий и яйца гельминтов по МУК 4.2.964-00.

Проводится также бактериологический контроль емкостей и укупорочных изделий (по МУК 2.1.4.1184-03) по двум показателям: ОМЧ и ОКБ.

Ёмкости считаются годными, если ОМЧ не более 2 КОЕ/мл при отсутствии ОКБ в 100 мл смыва с 4-х ёмкостей по 5,0 л или 10-ти по 2,0 л.

2.2.1 Метод определения Pseudomonas aeruginosa Исследуемую воду объемом 1000 мл делят на две емкости по 500 мл и в каждую добавляют по 50 мл среды Бонде, перемешивают и инкубируют при температуре 37±1 оС в течение 24-48 часов.

При наличии роста происходит помутнение и образование плёнки, пересевают на среду «Блеск» на 2 чашки Петри, на одну штрихом, на другую бляшками (3-4). Посевы инкубируют при t 37±1 оС 24 часа. Затем отмечают харктер роста на среде «Блеск». Вырастают темнокрасные колонии с золотистым блеском. При отсутствии характерного блеска, подозрительные колонии пересевают на косяк с МПА, на котором через часа при t 37 оС вырастают колонии с сине-зеленым пигментом.

При отсутствии роста на среде Бонде через 24 часа, пробы оставляют инкубировать до 48 часов. При отсутствии роста на среде Бонде или среде «Блеск», выдают отрицательный результат ( схема № 6 ).

Схема анализа воды на Pseudomonas aeruginosa.

исследуемая вода 2. Пересев пленки со среды Бонде на среду «Блеск» из каждой пробы на 2 чашки «штрихом» «уколом и бляшками»

При росте без блеска, пересев на скошенный питательный агар Положительный ответ: Pseudomonas aeruginosa обнаружена в 1000 мл воды.

2.3 Вода нецентрализованного водоснабжения Около 10% населения России пользуется местными источниками водоснабжения, колодцами, артезианскими скважинами и др. (в Кузбассе – 6,7%). Вода нецентрализованного водоснабжения по своему составу и свойствам также должна соответствовать определенным органолептическим, химическим и микробиологическим показателям.

В марте 2003 года введены в действие санитарные правила «Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения.

Санитарная охрана источников. СанПиН 2.1.4.1175-02».

Требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения При отсутствии ОКБ проводится определение глюкозоположительных колиформных бактерий с постановкой оксидазного теста.

Колифаги считаются дополнительным показателем, который определяют по постановлению Главного санитарного врача с учетом местных санитарных условий и эпидситуации.

В СанПиНе 2.1.4.1175-02 определены требования к содержанию и эксплуатации водозаборных сооружений нецентрализованного водоснабжения.

В радиусе 20 м от колодца не допускается устройство фермерских хозяйств, выгребных ям и другие виды деятельности (мытье автомашин, стирка белья), способствующие загрязнению воды.

2.4 Санитарная микробиология поверхностных водных объектов Основным источником централизованного водоснабжения населения являются поверхностные водоемы-реки и озера, но они же являются приемниками хозяйственно-бытовых, ливневых и промышленных сточных вод. Это обстоятельство приводит к резкому ухудшению гигиенического состояния воды водоемов. Особенно это проявляется в природных водоемах вблизи крупных городов, которые и являются основными потребителями воды. Поэтому разработан комплекс мер, для осуществления мониторинга за экологическим состоянием поверхностных вод. В частности разработан и введен в действие СанПин 2.1.5.980- «Гигиенические требования к охране поверхностных вод», который нормирует качество воды водных объктов в пунктах водозабора. Введены в действие МУК4.2.1884-04 «Санитарно-микробиологический и санитарнопаразитологический анализ воды поверхностных водных объектов».

Санитарно-микробиологический анализ воды водоемов-источников в черте населенных мест осуществляют по следующим показателям: ОМЧ, общие и колиформные бактерии, колифаги, патогенные возбудители кишечных инфекций (сальмонеллы, энтеровирусы). При выборе нового поверхностного источника централизованного водоснабжения или решения вопроса об использовании водоема для оздоровительных целей (купание) анализ качества воды проводят по более широкому набору микробиологических показателей, например, определяют титр энтерококков и стафилококков.

2.4.1 Правила забора проб воды из поверхностных водоемов 1. Пробы отбирают с использованием плавсредств или помостов, с глубины 10-15 см от поверхности и 30-50 см от дна. Недопустимо производить отбор проб с берега. Отбирают пробы воды батометром, устройством для фиксации стерильных емкостей с дистанционным управлениемоткрывания пробок. Объем пробы от 500 до 1500 мл в зависимости от целей анализа.

Отобранную пробу маркируют,сопровождают документом, где указывают место, дату, время забора, ФИО специалиста и другую информацию (температура воды, погодные условия).

Доставку проб осуществляют в сумках-холодильниках при температуре 4С. Анализ следует производить в течении 2 часов после забора.

Допустимо хранение в течении 6 часов в условиях холодильника.

Требования к составу и свойствам воды водных объектов в местах питьевого, хозяйственно-бытового и рекреационного водопользования (микробиологические показатели) СанПиН 2.1.5.980- 1. Возбудители кишечных Вода не должна содержать возбудителей 2. Жизнеспособные яйца Не должны содержаться в 25 л воды гельминтов и цисты Пробу воды тщательно перемещивают и готовят последовательные десятикратные разведения воды. В стерильные пробирки вносят по 9 мл стерильной воды или жидкости для разбавления. Затем в первую пробирку вносят 1 мл анализируемой воды, тщательно перемещивают новой стерильной пипеткой, набирают 1 мл полученного разведения 1:10 и переносят в следующую пробирку с 9 мл стерильной жидкости, получая разведения 1:100. такую операцию проводят еще 2 раза для получения разведений 1:1000 и 1:10000. Это важный этап подготовки проб воды, от которого зависит точность полученных результатов.

Полученные разведения используют для определения следующих микробиологических показателей:

2.4.3 Определение ОМЧ Определяется число колоний при t 37°С в течениии 24 часов и число колоний, выраcтающих при t 22°С в течении 72 часов.

ОМЧ при инкубации t 37°С-это группа микроорганизмов, внесенная в водоем в результате, как правило, антропогенного (фекального) загрязнения объекта (аллохтонная микробиота).

ОМЧ при инкубации t 22°С-группа сапрофитных микроорганизмовпредставителей автохтонной микрофлоры водоема, осуществляющей процессы самоочищения.

Соотношение числа этих групп микроорганизмов позволяет судить об интенсивности процессов самоочищения. При завершении процессов самоочищения коэффициент соотношения ОМЧ 22°С/ОМЧ 37°С равен 4 и выше. В местах загрязнения хозяйственно-бытовыми сточными водами численные значения обеих групп равны или близки.

Техника посевов на ОМЧ аналогична той, которая используется при определении ОМЧ питьевой водопроводной воды, за исключением, того, что высевается каждое разведение воды в 2-х повторностях для культивирования при температуре 37°С и 22°С.

При исследовании заведомо чистых вод, делают посевы воды без разведения, по 1 мл в 2 повторностях.

2.4.4. Определение ОКБ и ТКБ ОКБ-общие колиформные бактерии,основной интегральный показатель фекального загрязнения водоемов. ТКБ определяют одновременно в одних и тех же посевах с ОКБ. Определение колиформных бактерий выполняется титрационным методом и методом мембранной фильтрации. Сущность методов аналогична таковым, применяемым при исследовании воды питьевого водоснабжения. Важным отличием является то, что исследуемые объемы воды выбирают в зависимости от предполагаемого загрязнения и анализируют не только исходную пробу воды но и ее десятикратные разведения.

2.4.5. Определение колифагов Колифаги как показатель вирусного загрязнения воды поверхностных водоемов определяют прямым методом. Обьем воды для посева выбирают в зависимости от степени ее загрязнения, с таким расчетом, чтобы на чашках выросло до 300 БОЕ, без образования сливных зон.

2.4.6 Определение бактерий рода Salmonella Из возбудителей кишечных инфекций определяют бактерии рода Salmonella. Учитывают их отсутствие в 1000 мл воды (схема 7).

По 500 мл воды засевают в две среды накопления: селенитовый бульон, магниевую среду или среду Мюллера-Кауфмана Инкубируют при t 37°С 18-20 часов.

При обнаружении роста (помутнения) производят высев петлей на две чашки с висмут-сульфит агаром.

ВСА ВСА

Инкубируют при t 37°С 18-20 часов.

При обнаружении черных, «зеркальных» колоний, подозрительных на сольмонеллы, 4колоний с каждой чашки пересевают на дифференциально-диагностические среды Клиглера или Ресселя, для определения биохимических свойств и последующей серологической идентификации.

Сальмонеллы определяют: при выборе новых источников водоснабжения и зон рекреации; при превышении нормативов по ОКБ и ТКБ, при ухудшении эпидобстановки, при сбросах недостаточно обеззараженных сточных вод и др.

Раздел 3. Санитарная микробиология почвы Почва-главный резервуар и естественная среда обитания микроорганизмов в природе. Количество микроорганизмов в 1 г почвы достигает нескольких миллиардов (109-1010 в 1 г).

Наиболее обильна микрофлора почвы на глубине 10-20 см. В этом слое преобладает автохтонная микрофлора (типичная и постоянная для данного биотопа), участвующая в основных биохимических процессах превращения веществ. Именно здесь протекают процессы гниения, брожения, биологическая фиксация азота, нитрификация и денитрификация, трансформация соединений углерода, серы, железа и фосфора. Микрофлора почвы представлена аэробами и анаэробами, аутотрофами и гетеротрофами, способными размножаться в широком диапазоне температур от 20 до 60°С. Среди них бактерии, актиномицеты, грибы и бактериофаги, которые постоянно конкурируют между собой за субстраты питания, за кислород, воду. В нормально функционирующих почвах автохтонная микрофлора осуществляет процессы самоочищения от органических загрязнений и благодаря выраженному антагонизму приводит к гибели патогенных представителей аллохтонной (чужеродной) микрофлоры.

Однако, антропогенное загрязнение почвы токсическими промышленными отходами (пестициды, фенолы, соли тяжелых металлов, угольная пыль, формальдегид, нефтепродукты) может привести к необратимым изменениям; снижению антагонистических свойств автохтонной микрофлоры или полному подавлению ее самоочищающей способности. Так, например, подавление аммонификаторов приводит к накоплению неразложившихся органических субстратов и исключению азота из круговорота веществ. Подавление нитрифицирующих бактерий приводит к накоплению аммиака, солей аммония, что также приводит к нарушению экологического баланса. Поэтому необходим контроль за состоянием процессов самоочищения, осуществляемых аммонификаторами, нитрифицирующими, целлюлозоразрушающими бактериями и грибами.

Загрязнение почвы фекально-хозяйственными отбросами приводит к попаданию в нее патогенных микроорганизмов. В выделениях человека и животных могут содержаться возбудители дизентерии, сальмонеллеза, холеры, лептоспироза, бруцеллеза, кишечные вирусы. Они могут сохранятся в почве жизнеспособными от нескольких дней до месяцев. В почве длительно хранятся споры возбудителей ботулизма, столбняка, газовой гангрены, сибирской язвы. Почва для них является вторичным резервуаром.

Некоторые потенциально-патогенные микроорганизмы могут размножаться в почве, становясь полноправными сочленами этих экосистем. Это псевдомонады, листерии, иерсинии, лептоспиры, некоторые микобактерии. Они могут стать возбудителями так называемых сапронозных инфекций.

Таким образом, санитарно-микробиологическое исследование почвы является важным в плане оценки ее эпидемической безопасности и экологической полноценности (способности к самоочищению).

Санитарно-микробиологическое исследование почвы регламентируется СанПиНом 2.1.7.-1287-03 «Санитарно-эпидемиологические требования к качеству почвы». Согласно этому документу, принятому в 2003 году, производится оценка качества почвы следующих территорий: жилые зоны, детские дошкольные и школьные территории, зоны санитарной охраны водоемов, рекреационные зоны (скверы, парки, пляжи), промышленные и транспортные территории и почвы сельскохозяйственного назначения.

Оценка эпидемической безопасности почвы производится по следующим микробиологическим, энтомологическим и гельминтологическим показателям:

индексу БГКП (бактерии группы кишечной палочки), индексу энтерококков, индексу сальмонелл, по количеству яиц геогельминтов, по количеству личинок и куколок мух.

По эпидемиологическим показаниям определяют цисты простейших, споры возбудителей сибирской язвы, патогенных клостридий и индекс энтеровирусов или БОЕ фагов.

Критерии оценки степени эпидемической опасности почвы загрязнения БГКП энтеро бактерии, геогель и куколки фагов на Показатели биологической активности почвы определяются при необходимости углубленной оценки ее санитарного состояния и способности к самоочищению.

Основными показателями биологической активности почвы являются:

общая микробная численность (ОМЧ) количество аммонификаторов количество нитрифицирующих бактерий количество актиномицетов и грибов количество (индекс) термофилов титр клостридий (перфрингенс-титр).

На первом этапе исследований определяют химические показатели ферментативных процессов в почве: «дыхание» почвы окислительновосстановительный потенциал, РН почвы, соотношение азота аммиака и нитратовNH4/NO3. При этом, интенсивность процессов самоочищения почвы определяется по следующим критериям:

Показатели интенсивности самоочищения почвы Интенсивность Критерии самоочищения почвы Кроме того, к интегральным показателям биологической активности почвы относится «санитарное число С».

Санитарное число С-это отношение количества почвенного белкового (гумусного) азота «А» в милиграммах на 100 г абсолютно сухой почвы к количеству «органического» азота «В» в милиграммах на 100 г абсолютно сухой почвы. Таким образом С=А/В. Оценка санитарного состояния почвы по этому показателю проводится по таблице № 8 (МУК 2.1.7.730-99).

Показателем санитарного состояния почвы и способности ее к самоочищению является общая микробная численность (ОМЧ). Общая численность сапрофитов определяется при t 22°С и t 37°С. В чистых почвах преобладает автохтонная микробиота, растущая при t 22°С, а высокое ОМЧ, определяемое при t 37°С свидетельствует об антропогенном биологическом загрязнении. Возможно определение интегрального показателя ОМЧ при t 28-30°С. Степень биологической активности почвы ярко отражается в численности аммонификаторов и нитрифицирующих бактерий, осуществляющих процессы превращения аммонийного азота в нитриты и нитраты. Индекс термофилов введен для оценки загрязнения почвы компостом и навозом и процессов распада органических растительных углеродсодержащих соединений. Оценку биологической активности почвы проводят по критериям, которые изложены в таблице № 9, согласно методическим указаниям по санитарно-микробиологическому исследованию почвы 1446-76 «Оценочные показатели состояния почвы населенных мест» от 7 июля 1977 г.

Оценку санитарного состояния почвы проводят путем сопоставления данных, полученных на контрольных (условно-чистых) и опытных участках изучаемых территорий.

Критерии биологической активности почвы загрязненная Частота отбора проб почвы для санитарно-микробиологического и энтомологического анализа зависит от категории почв. Для оценки санитарного состояния почв населенных мест отбор проб производится не менее 1-2 раза в год.

Отбор и подготовка проб к исследованию проводится в соответствии с ГОСТ 17.4.4.02-84 «Охрана природы. Почва. Методы отбора и подготовки проб почвы для химического, бактериологического и гельминтологического анализа», а также с учетом рекомендаций МУ 2.1.7.730-99 «Гигиеническая оценка качества почвы населенных мест».

Почва населенных мест исследуется с учетом функциональных зон города, рельефа местности. На площади 100 м 2, выделяется пробная площадка м2, на которой отбирают методом конверта 10 обьединенных проб из точек по 200-250 г почвы. Глубина отбора проб послойна, от 0-5 см и от 2см. Объединенную пробу помещают в стерильные контейнеры с крышками, упаковывают в полиэтиленовые пакеты, маркируют. Время отбора проб до начала исследования не должно превышать 1 суток.

Подготовка проб к анализу производится в сооответствии с видом анализа.

Для микробиологического исследования усредненную пробу весом 500 г просеивают через стерильное сито для удаления посторонних примесей (камни, корни, щепки), отбирают навеску в зависимости от определяемых показателей от 1 до 55 г, готовят суспензию 1:10 на стерильной водопроводной воде, встряхивают на механическом диспергаторе или подвергают действию ультразвука и после отстаивания готовят десятикратные разведения до 10-5 (1:100000) 3.2 Определение общего количества бактерий в почве Для посева выбирают не менее двух разведений почвы в зависимости от предполагаемой степени загрязнения. Пробу забирают стерильной пипеткой 1 см3 суспензии, вносят на дно стерильной чашки Петри и заливают 15-20 мл расплавленного питательного агара (t 450С).

перемешивают и оставляют для застывания в горизонтальном положении.

Каждое разведение засевают в четыре параллельные чашки. После застывания по две чашки с посевами разведений помещают в термостат при t 370С на 24 часа, и при t 220С на 48 часов. После инкубации подсчитывают выросшие колонии, находят средние полказатели ОМЧ при t 220С и 370С и проводят пересчет на 1 г почвы.

3.3 Определение числа (индекса) термофилов в почве Из разведений почвы от 1:10 до 1:1000000 (10-1-10-6) делают посев по 0,1 мл на 2-3 параллельные чашки Петри с толстым слоем МПА. Культивируют при температуре 600С 24 часа. Подсчитывают количество колоний в каждом разведении и производят пересчет на 1 г. почвы.

3.4 Определение титра нитрифицирующих бактерий Разведения почвы от 10-1 до 10-5 высевают во флаконы с минеральной средой Виноградского по 1,0 мл, 2 флакона со средой оставляют незасеянными, для контроля. Посевы инкубируют при температуре 280С 14-15 суток. На 5-7 день и 14-15 день определяют наличие азотистой и азотной кислоты, которые образуются при размножении нитрифицирующих бактерий.



Pages:   || 2 |
 




Похожие работы:

«МИНЗДРАВСОЦРАЗВИТИЯ РОССИИ Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования ИРКУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО ИГМУ Минздравсоцразвития России) Г.М. Федосеева, В.М. Мирович ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ И ЛЕКАРСТВЕННОЕ РАСТИТЕЛЬНОЕ СЫРЬЕ, СОДЕРЖАЩИЕ ПОЛИСАХАРИДЫ Учебно-методическое пособие к практическим занятиям по фармакогнозии Рекомендовано ФМС...»

«ВЫСШ ЕЕ П Р О Ф Е С С И О Н А Л Ь Н О Е О Б Р А ЗО В А Н И Е ОРЕНБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ В.Ф. АБАИМОВ ДЕНДРОЛОГИЯ Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности Лесное хозяйство 3-е издание, переработанное ACADEMA Москва Издательский центр Академия 2009 УДК 630(075.8) ББК 43я73 А13 Рецензенты: д-р с.-х. наук, проф. З.Я. Нагимов (Уральский государственный...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тамбовский государственный технический университет СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ И МЕЛИОРАТИВНЫЕ МАШИНЫ Методические указания по выполнению контрольных работ для студентов 3, 4 курсов заочной формы обучения специальности 110301 Тамбов Издательство ГОУ ВПО ТГТУ 2011 1 УДК 631.3(07) ББК П072я73-5 К207 Рецензент Кандидат педагогических наук, доцент кафедры Техника и...»

«Министерство лесного хозяйства Республики Беларусь Республиканское унитарное предприятие Белгипролес Научно-техническая информация в лесном хозяйстве Выпуск № 7 МЕТОДИЧЕСКИЕУКАЗАНИЯ ПО СПОСОБАМ И СРОКАМ ПОСЕВА СЕМЯН В ПИТОМНИКЕ ЭКОЛОГО-ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОВРЕМЕННОЙ СИТУАЦИИ В ЛЕСООХОТНИЧЬЕМ ХОЗЯЙСТВЕ МАТЕМАТИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ СОХРАННОСТИ И ПОВРЕЖДАЕМОСТИ ПОДРОСТА В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ТЕХНОЛОГИЙ ПОСТЕПЕННЫХ РУБОК Минск, 2007 1 СОДЕРЖАНИЕ I Методические указания по способам и срокам посева...»

«Д.А. Мидоренко, В.С. Краснов Мониторинг водных ресурсов ТВЕРЬ 2009 ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тверской государственный университет Д.А. Мидоренко, В.С. Краснов Мониторинг водных ресурсов Учебное пособие ТВЕРЬ 2009 2 УДК 504.4.064.36(075.8) ББК Д220.8я73-1 Рецензенты: Казанский технологический университет доктор технических наук, профессор В.Н. Башкиров Петрозаводский государственный университет кандидат...»

«КОЛЫЧЕВ НИКОЛАЙ МАТВЕЕВИЧ МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ ОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Научная сельскохозяйственная библиотека Биобиблиография ученых КОЛЫЧЕВ НИКОЛАЙ МАТВЕЕВИЧ (К 70-летию со дня рождения) ОМСК – 2009 2 УДК: 016:579:619(092) Настоящий библиографический указатель является продолжением серии биобиблиографии ученых университета и посвящен доктору...»

«БАКИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ (АЗЕРБАЙДЖАН) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ МОЛДОВЫ (МОЛДОВА) ГРОДНЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. ЯНКИ КУПАЛЫ (БЕЛАРУСЬ) ЕВРАЗИЙСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. Л.М. ГУМИЛЕВА (КАЗАХСТАН) ИНСТИТУТ ПСИХОТЕРАПИИ И ПСИХОЛОГИЧЕСКОГО КОНСУЛЬТИРОВАНИЯ (ГЕРМАНИЯ) КАЗАХСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. АЛЬ-ФАРАБИ (КАЗАХСТАН) КАЛМЫЦКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ (РОССИЯ) КИЕВСКИЙ СЛАВИСТИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ (УКРАИНА) МИНСКИЙ ИНСТИТУТ УПРАВЛЕНИЯ (БЕЛАРУСЬ)...»

«Министерство сельского хозяйства РФ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Мичуринский государственный аграрный университет РОЛЬ ЯЗЫКА И ЛИТЕРАТУРЫ В ДУХОВНО-НРАВСТВЕННОМ ВОСПИТАНИИ ЛИЧНОСТИ Материалы II Всероссийской научно-практической интернет-конференции Мичуринск-наук оград ФГБОУ ВПО МичГАУ 2014 УДК 374.01 Печатается по решению РедакционноББК 74.005.1 издательского совета Мичуринского Р68 государственного аграрного...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ГОРНО-АЛТАЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Биолого-химический факультет Кафедра органической, биологической химии и МПХ СОГЛАСОВАНО УТВЕРЖДАЮ Декан БХФ Проректор по УР В.Н. Алейникова О.А. Гончарова __2008 г. _2008 г. УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС ПО ДИСЦИПЛИНЕ ИСТОРИЯ И МЕТОДОЛОГИЯ ХИМИИ по специальности 020101 Химия...»

«Министерство образования и науки Украины Севастопольский национальный технический университет МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ к расчетно-практическому занятию по дисциплине Основы экологии Определение размеров ущерба, обусловленного загрязнением земельных ресурсов, вследствие нарушения природоохранного законодательства Украины для всех специальностей дневной и заочной форм обучения Севастополь Create PDF files without this message by purchasing novaPDF printer (http://www.novapdf.com)...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ РАДИОТЕХНИКИ, ЭЛЕКТРОНИКИ И АВТОМАТИКИ (МГТУ МИРЭА) ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И МЕТОДЫ РОСТА МОНОКРИСТАЛЛОВ, ВЫРАЩИВАНИЕ КРИСТАЛЛОВ Al2O3 БЕСТИГЕЛЬНОЙ ЗОННОЙ ПЛАВКОЙ Методические указания по выполнению лабораторной работы по курсу Физическая химия материалов и процессов электронной техники...»

«ФГБОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновская МОО Ассоциация практикующих ветеринарных врачей АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции 25 – 26 апреля 2012 года Ульяновск – 2012 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 631 Актуальные проблемы инфекционной...»

«Министерство сельского хозяйства РФ Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Мичуринский государственный аграрный университет А.Н. Негреева, Е.Н. Третьякова, В.А. Бабушкин, И.А. Скоркина ПТИЦЕВОДСТВО НА МАЛОЙ ФЕРМЕ Допущено министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов сельскохозяйственных учебных заведений, обучающихся по специальности 110305 Технология сельскохозяйственного производства и...»

«ПЕТЕРБУРГСКОЕ ВОСТОКОВЕДЕНИЕ Электронная библиотека Музея антропологии и этнографии им. Петра Великого (Кунсткамера) РАН http://www.kunstkamera.ru/lib/rubrikator/03/03_03/978-5-85803-398-1/ © МАЭ РАН Электронная библиотека Музея антропологии и этнографии им. Петра Великого (Кунсткамера) РАН http://www.kunstkamera.ru/lib/rubrikator/03/03_03/978-5-85803-398-1/ © МАЭ РАН РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК Музей антропологии и этнографии им. Петра Великого (Кунсткамера) Степанова Ольга Борисовна ТРАДИЦИОННОЕ...»

«ВЕТЕРИНАРНАЯ ХИРУРГИЯ Учебно-методический комплекс ММIX МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования ГОРНО-АЛТАЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Сельскохозяйственный университет Кафедра хирургии, терапии и акушерства ВЕТЕРИНАРНАЯ ХИРУРГИЯ Учебно-методический комплекс для студентов, обучающихся по специальности 111201 Ветеринария Горно-Алтайск РИО Горно-Алтайского...»

«УДК.662.997 УМБЕТОВ ЕРИК СЕРИККАЛИЕВИЧ. Обоснование параметров и разработка трубчатого гелиоколлектора с сотовым прозрачным покрытием 05.14.08– Энергоустановки на основе возобновляемых видов энергии Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Республики Казахстан Алматы, 2007 Работа выполнена в Республиканском государственном предприятий Научно-производственный центр механизации сельского хозяйства (РГП НПЦ механизации сельского хозяйства)...»

«МИНОБРНАУКИ РОССИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Ухтинский государственный технический университет (УГТУ) СТРОИТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ Методические указания к лабораторным работам Ухта, УГТУ, 2013 УДК 691 (075.8) ББК 383я7 Е 78 Ерохина, Л. А. Е 78 Строительные материалы [Текст] : метод. указания к лабораторным работам / Л. А. Ерохина, Н. С. Майорова, Е. В. Скутина. – Ухта : УГТУ, 2013. – 66 с. Методические указания предназначены...»

«Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное научное учреждение РОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ПРОБЛЕМ МЕЛИОРАЦИИ (ФГБНУ РосНИИПМ) УДК 626.823.916 В. Н. Щедрин, Ю. М. Косиченко, Е. И. Шкуланов, Г. Л. Лобанов, Е. А. Савенкова, А. М. Кореновский МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ПРОЕКТИРОВАНИЮ ПРОТИВОФИЛЬТРАЦИОННЫХ ПОКРЫТИЙ ОРОСИТЕЛЬНЫХ КАНАЛОВ Новочеркасск 2013 Содержание Введение 1 Область применения 2 Нормативные ссылки 3 Термины и...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ УЛЬЯНОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.Н. УЛЬЯНОВА ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ КАФЕДРА ПЕДАГОГИКИ И ПСИХОЛОГИИ МЛАДШЕГО ШКОЛЬНИКА АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ СОВРЕМЕННОГО ОБРАЗОВАНИЯ: ОПЫТ И ИННОВАЦИИ МАТЕРИАЛЫ МЕЖДУНАРОДНОЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ КОНФЕРЕНЦИИ (ЗАОЧНОЙ), ПОСВЯЩЕННОЙ 25-ЛЕТИЮ СО ДНЯ СОЗДАНИЯ

«Игорь Ростиславович Шафаревич Русофобия Русофобия: Эксмо; 2005 ISBN 5-699-12332-6 Аннотация Русофобия, выдающегося мыслителя нашего времени И. Р. Шафаревича, вышла более двадцати лет назад. Она была вызвана потоком публикаций, враждебных России. С тех пор ситуация усугубилась. Сейчас русофобия поощряется на государственном уровне. Иначе как понять политику правительства страны, направленную на деградацию и вырождение русской нации. Русофобия, пожалуй, самая еврейская книга Шафаревича, вообще...»






 
© 2013 www.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.